轉染是將外來核酸傳遞到真核細胞中以修飾宿主細胞的遺傳組成的過程。在過去的30年里，轉染因其廣泛應用于研究疾病的細胞過程和分子機制而越來越受歡迎。了解疾病的分子途徑，可以發(fā)現(xiàn)可能用于疾病診斷和預后的特定生物標志物。此外，轉染可以作為基因***中的策略之一，用于***無法***的遺傳性遺傳病。***，生命科學技術的進步允許將不同類型的核酸轉染到哺乳動物細胞中，這些核酸包括脫氧核糖核酸(DNA)，核糖核酸(RNA)以及小的非編碼RNA，如siRNA,shRNA和miRNA。通常轉染可分為穩(wěn)定轉染和瞬時轉染兩種類型。穩(wěn)定轉染是指通過將外源DNA整合到宿主核基因組中，或在宿主核中作為染色體外元件維持一個外源載體來維持轉基因的長期表達。該轉基因可然后通過細胞的復制進行本構性表達。相比之下，瞬時轉染不需要將核酸整合到宿主細胞基因組中。核酸可以以質(zhì)粒的形式或寡核苷酸的形式轉染。因此，隨著宿主細胞的復制，轉基因表達**終會丟失。瞬時轉染通常用于短期研究，以研究特定基因敲入/敲入的影響。相比之下，穩(wěn)定轉染在需要大規(guī)模蛋白質(zhì)生產(chǎn)的長期遺傳和藥理學研究中很有用。其結構的一個共同特征是分子中存在許多帶正電的基團，這些基團被質(zhì)子化成帶正電的聚合物。中國臺灣轉染試劑檢測

脂質(zhì)顆粒的加入導致內(nèi)體DNA釋放增加。Delgado等人通過在腎細胞中添加魚精蛋白，設法提高了固體脂質(zhì)納米顆粒的轉染效率，但與不添加魚精蛋白的對照組相比，相同的多功能單元，DNA/魚精蛋白/SLN(固體脂質(zhì)納米顆粒)，降低了HEK 293細胞系(人胚胎腎細胞)的轉染效率。這給了我們希望，通過加入必要的配體的可能性，使用納米顆粒的轉染可能會調(diào)整到給定的細胞類型。Bahrami et al.經(jīng)表明，不同種類的納米顆粒以不同的方式與細胞膜結合。形成這些鍵的差異取決于它們的球形或非球形形狀，也取決于不同納米顆粒所表現(xiàn)出的各種粘附電位以及它們進入后引起的膜形狀變化。Prabha等人的實驗表明，納米顆粒的大小對COS-1(非洲綠猴腎細胞)和HEK 293細胞系的轉染效率有***影響:使用較小的納米顆粒時，轉染效率分別是使用較大納米顆粒的27倍和4倍。在兩種分散體中，小顆粒和大顆粒的細胞攝取、表面電荷和DNA釋放是相同的，這表明使用納米顆粒進行基因傳遞的效率受到許多因素的影響，它們的使用應該根據(jù)細胞類型和應用條件進行具體調(diào)整。此外，用作納米顆粒分散劑的不同物質(zhì)，如十六種不同類型納米顆粒的豬肺表面活性劑和牛血清白蛋白，對其在溶液中的團聚有***影響。陜西干細胞轉染試劑陽離子聚合物是一種非病毒載體。

化學轉染可分為基于脂質(zhì)體或非基于脂質(zhì)體。基于脂質(zhì)體的轉染試劑是一種化學物質(zhì)，它能夠形成帶正電的脂質(zhì)聚集體，這些聚集體可以與宿主細胞的磷脂雙分子層順利融合，從而允許外來遺傳物質(zhì)以**小的阻力進入。另一方面，非脂質(zhì)體轉染試劑可進一步分為幾類，包括磷酸鈣、樹狀大分子、聚合物、納米顆粒和非脂質(zhì)體。磷酸鈣是轉染中使用的低價的化學物質(zhì)之一，轉染涉及將帶正電的鈣離子(Ca2+)與帶負電的核酸結合，形成沉淀，然后被宿主細胞吸收。然而，磷酸鈣轉染的成功率較低，需要事先優(yōu)化才能達到較高的轉染效率。樹狀大分子是三維的、高度支化的有機大分子，可以與核酸形成復合物，作為一種替代的非脂質(zhì)體轉染試劑，它優(yōu)于磷酸鈣。然而，使用樹狀大分子的轉染效率仍然低于病毒載體和脂質(zhì)體試劑。陽離子聚合物也可以與帶負電荷的核酸形成復合物，這有助于細胞通過內(nèi)吞作用吸收遺傳物質(zhì)。與病毒載體相比，陽離子聚合物產(chǎn)生的細胞毒性較小，但效率也較低。納米顆粒由于其體積小，增強了核酸進入宿主細胞的能力，正在成為非脂質(zhì)體轉染的替代選擇。

在轉染實驗中使用對照對于確定所使用的轉染試劑和核酸的效果和效率至關重要。通常，質(zhì)粒轉染和寡核苷酸轉染實驗都需要陽性對照、陰性對照、未轉染對照和模擬轉染對照。陽性對照是先前已被證明對轉染實驗產(chǎn)生已知影響的DNA或RNA，例如影響特定下游遺傳靶點的表達。在轉染工作的初始階段，需要一個陽性對照來建立一個優(yōu)化的轉染方案，之后，陽性對照可以作為參考，與實驗組進行比較。另一方面，陰性對照用于確認宿主細胞中預期的基因表達變化是否歸因于轉染而不是其他原因。在質(zhì)粒DNA轉染中，陰性對照可以是缺乏DNA和轉染載體的反應，或者兩者都沒有，只有宿主細胞。在小RNA轉染中，陰性對照包含一個非同源序列，該序列通常是一個與靶序列具有相同核苷酸長度和組成但與任何已知哺乳動物基因不同源的打亂序列。未轉染的對照包括不含轉染試劑和核酸的細胞培養(yǎng)，作為宿主細胞基本信息的對照，包括活力、表型，更重要的是，不受轉染影響的靶基因的基線表達水平。模擬轉染是指不含遺傳靶標或核酸的轉染，可以評估轉染試劑(如背景自熒光噪聲)產(chǎn)生的影響。在質(zhì)粒轉染實驗中，推薦使用空質(zhì)粒對照作為模擬轉染對照。在轉染實驗中使用對照對于確定所使用的轉染試劑和核酸的效果和效率至關重要。

影響物理轉染或機械轉染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。例如，電穿孔技術依賴于電場來增加宿主細胞膜的通透性，以內(nèi)化外來核酸。因此，電穿孔過程中的電壓和持續(xù)時間是決定電穿孔成功與否的重要因素。施加高壓的長時間電穿孔可能會導致細胞損傷并降低轉染效率。通過增加電脈沖的數(shù)量也可以提高電轉染效率，但這可能會降低細胞活力。另一方面，電轉染效率取決于所使用的細胞類型，每當要電轉染一種新的細胞類型時，應優(yōu)化電穿孔條件。一些細胞如T淋巴細胞，即使在標準的電穿孔條件下也可能轉染不良，而電轉染成纖維細胞通常可以產(chǎn)生良好的轉染結果。電穿孔緩沖液的組成是影響轉染效率的另一個關鍵參數(shù)。據(jù)報道，電穿孔緩沖液中的ATP酶抑制劑如利多卡因可提高電穿孔后的細胞活力，而使用K+-based緩沖液的轉染效率優(yōu)于Mg2+-based緩沖液。假設Mg2+離子在***ATP酶以恢復電穿孔后的離子穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關鍵作用，以比較大限度地減少細胞死亡，但可能會降低轉染效率。因此，應優(yōu)化由多種成分組成的合適的電穿孔緩沖液配方，以確保轉染效率和電穿孔后細胞活力之間的平衡。常用的物理/機械轉染方法包括電穿孔、聲孔、基因顯微注射和激光照射。中國臺灣轉染試劑檢測

基于病毒的轉染，或者更具體地稱為轉導，涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細胞。中國臺灣轉染試劑檢測

PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時，它可以與質(zhì)粒DNA結合并凝聚成致密顆粒。研究人員發(fā)現(xiàn)，配體在PLL上的共價附著可通過受體介導的途徑***增強內(nèi)吞作用。例如，涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體，在肝細胞上表達。當ASOR共價附著在PLL上時，受體介導的內(nèi)吞作用和質(zhì)粒的細胞攝取***增加。此外，與葉酸或轉鐵蛋白相關的PLL已被開發(fā)出來，并在將pDNAs轉染到*細胞中取得了實質(zhì)性進展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥氨酸)。PLO具有PLL的特性，但轉染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明，與PLL相比，PLO以更低的電荷(+/?)比率凝聚pDNA，并且在相同的多陽離子/pDNA質(zhì)量比下，PLO/pDNA復合物比PLL/pDNA復合物更耐破壞。然而，由于其介導內(nèi)體逃逸的能力較差，帶正電的多氨基酸的轉染效率仍然很低。中國臺灣轉染試劑檢測