羅丹明123一種可對活細胞線粒體染色的細胞染色試劑。羅丹明123可透過細胞膜且在活細胞的線粒體內聚集,并發出黃綠色熒光。羅丹明123***用作檢測線粒體膜電位,也常用于細胞凋亡檢測。由于細胞內ATP的量與羅丹明123的熒光強度之間有相關性,此熒光染料被應用于檢測細胞內的ATP。羅丹明123的比較大激發波長為507nm,比較大發射波長為525nm。在熒光顯微鏡下觀察,呈現黃綠色熒光。
一:工作液配制用緩沖液或者預熱的培養液直接稀釋儲存液到需要的工作液濃度(1~20μM),充分混勻。具體的工作液濃度使用者要根據自身實驗體系進行調整?!咀⒁狻浚簩τ诩毎麑嶒灒刂坪每傮w稀釋倍數,DMSO在培養液中的濃度不能超過0.1%,以避免DMSO對細胞的影響。
二:熒光顯微鏡觀察1、用載玻片準備細胞。細胞數目應為5×104~5×105個/mL。2、在載玻片上孵育細胞,用PBS或HBSS洗滌細胞。3、將Rhodamine123工作液加入載玻片并在37℃下孵育30min至1小時。4、去除Rhodamine123溶液并用培養液洗滌細胞(洗滌細胞后如果要固定,加入10%福爾馬林緩沖液并孵育15~20min,接著用PBS洗滌)。5、熒光顯微鏡觀察細胞。 脂溶性熒光染料cy3、cy5、cy7等。中國澳門小動物熒光染料
染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一類親脂性熒光染料家族,用于標記細胞膜和疏水性組織。這是一類環境敏感型熒光染料,當它們與膜結合或者與親脂性生物分子(例如蛋白質,雖然在水中其熒光強度很弱)結合時,其熒光強度***增強。它們具有很高的淬滅系數,偏光依賴性和很短的激發壽命。一旦應用于細胞中,這種染料會在細胞內質膜中逐步擴散,導致在其比較好濃度條件下,將整個細胞染色。它們不同的熒光顏色:DiI(橙色熒光)、DiO(綠色熒光)、DiD(紅色熒光)、DiR(深紅色熒光),為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術提供了一種便捷的工具。DiO和DiI可以分別與標準的FITC和TRITC濾光器一同使用。其中,DiO可以被633 nm He-Ne激光激發,并且具有比DiI更長的激發和發射光波長,為標記細胞和組織的那些本身就具有本底熒光的染料提供了非常***的替代品。DiR在***成像或者示蹤中非常有用,因為它們所發射的紅外光可以高效地穿過細胞和組織,并且在紅外光范圍內,其本底熒光水平很低。中國澳門小動物熒光染料南京星葉生物科技有限公司Super Fluor系列(效果同Alexa Fluor 系列)。
CY5.5-NHS熒光染料是一種廣泛應用于生物標記和成像的熒光染料,CY5.5-NHS熒光染料具有優異的熒光性能。其激發波長約為675nm,發射波長約為695nm,位于紅色光譜區域,這使得它在生物樣本中具有較強的穿透力,能夠深入組織內部進行標記和成像。此外,CY5.5-NHS熒光染料具有較高的熒光量子產率和光穩定性,可以在較長時間的激發下保持穩定的熒光信號,從而確保實驗結果的準確性和可靠性。CY5.5-NHS熒光染料作為一種***的熒光染料,在生物科學研究領域具有廣泛的應用前景。其優異的熒光性能、良好的生物相容性、***的適用范圍以及易于合成和修飾的優點,使得它成為生物醫學研究中不可或缺的重要工具。
異硫氰酸熒光素(FITC)是一種有機熒光染料,目前,這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細胞術中。在495/517nm處,該染料會產生激發/發射峰值,并可借助異硫氰酸鹽反應基團與不同抗體結合,該基團可以和蛋白質上的氨基、巰基、咪唑、酪氨酰、羰基等基團相結合。而它的基本成分——熒光素,其摩爾質量為332g/mol,常被用作熒光示蹤劑。FITC(389g/mol)是用于熒光顯微鏡技術的首批染料,且其被當成AlexaFluor®488等后續熒光染料的發端。該染料的熒光活性取決于它的大共軛芳香電子系統,而該系統受藍色光譜中的光所激發。經常與FITC同時使用的另一種染料是與其相似的TRITC[四甲基羅丹明-5(6)-異硫氰酸]。與FITC相反,TRITC并非熒光素,而是羅丹明家族的衍生物。羅丹明也具有一個大的共軛芳香電子系統,正是該系統引發了它們的熒光行為。還有一點與FITC相反,TRITC(479g/mol)由比較**長為550nm的綠色光譜中的光所激發,它的比較大發射波長為573nm。與蛋白質(例如,抗體)結合也基于異硫氰酸鹽反應基團。Super Flour 系列熒光探針,具有更強的熒光強度,更廣的pH應用范圍(pH 4~10), 更好的抗淬滅性。
CY5熒光染料是一種被廣泛應用于生物分子檢測和熒光成像等領域的高效、穩定的熒光標記試劑。它具有出色的熒光性能和良好的生物相容性。Cy5屬于小分子染料,其*大發射波長為670nm,其標記的抗體適用于所有配備633nm氬離子激光器的流式細胞儀,檢測通道一般是FL4通道。除流式細胞術外,Cy5同樣適用于傳統的熒光顯微鏡技術。需注意的是,Cy5與單核細胞和粒細胞的非特異性結合多,實驗結果容易出現假陽性。Cy5.5含有一個游離胺基,可與多種官能團共軛,包括NHS酯和環氧化合物。激發和發射的最大值分別為678nm和694nm。Cy5.5已應用于各種基于熒光的實驗中。Cy5.5是一種遠紅色(和近紅外)發射染料,是熒光測量的理想選擇。Cy5.5具有成本效益,且其標記化學操作簡單,適合于潛在的***藥物開發Cy5.5標記因子VIIa是用來想象**的。用這些靶向蛋白標記的Cy5.5在**異種移植物上特異定位至少14天,但未結合的Cy5.5不能定位于任何異種移植或***。這種**血管內皮細胞中抗組織因子的成像方法可用于檢測原發性**和轉移以及監測體內***反應[1]。pH/溫度敏感磁性納米凝膠結合Cy5.5標記乳鐵蛋白(Cy5.5-Lf-MPNA納米凝膠)是一種有前途的膠質瘤術前MRI和術中熒光成像的對比劑[2]Super Fluor 488(效果同Alexa Fluor 488)標記蛋白。成都熒光染料高分子
CY7.5熒光染料是一種被廣泛應用于生物分子檢測和熒光成像等領域的高效、穩定的熒光標記試劑。中國澳門小動物熒光染料
一、體外生物發光試驗熒光素試劑的制備:D-熒光素,鉀鹽,無菌純水,完全培養基(自行配置)1、用無菌水制備100X熒光素原液(15mg/ml),輕輕顛倒搖動至熒光素完全溶解?;靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2、將D-luciferin,potassiumsalt溶解于預熱好的組織培養基中制備成濃度為150μg/ml的工作液。用組織培養基1∶100稀釋儲存液,配置工作液(終濃度150μg/mL)3、去除培養細胞的培養基圖像分析前,向細胞培養板中添加1×熒光素工作液,然后進行圖像分析-注射器濾膜過濾除菌,0.2μm注:成像前在37℃下對細胞進行短時間孵育可增強信號。中國澳門小動物熒光染料