在一項將質粒DNA轉染到HUVEC中的研究中,使用包括Effectene和FuGENE 6在內的非脂質體試劑比脂質體試劑DOTAP(18%)產生了更好的轉染效率(34%和33%)。在另一項用質粒DNA轉染HUVEC的研究中,與Effectene和FuGENE 6或HD等非脂質體試劑(48小時時均<20%)相比,脂質體試劑顯示出更高的轉染效率(Lipofectamine LTX在48小時時約為38%,Lipofectamine 2000在48小時時約為23%)。在這些研究中,基于脂質體和非脂質體的試劑轉染HUVECs的效率無法得出結論,主要是由于所用試劑的范圍存在差異。然而,一致的觀察結果表明轉染效率仍然存在無論使用何種試劑,低于40%無疑暗示原代細胞是一種難以轉染的細胞類型。基因是陽離子聚合物作為轉染劑的主要應用。上海脂質體轉染試劑
目前核酸遞送系統的局限性之一是無法深入穿透組織和***,如實體瘤和大腦。通常情況下,只能到達并轉染細胞的外層,從而導致***效果不佳。愛潑斯坦巴爾病毒(EBV),一種人類**病原體,似乎通過劫持**微環境中的外泌體進行細胞間通訊來克服這一點。外泌體是小的膜囊泡(40 ~ 200nm),起源于內吞。在被釋放到細胞外環境后,由于其表面存在細胞識別分子,它們可以與鄰近細胞融合。外泌體外泌體是細胞間mRNA、小rna (miRNA)和信號因子的載體,通過經歷細胞內化和釋放的幾個周期,能夠跨越幾層組織。它們可以由多種細胞分泌,包括腫瘤細胞、樹突狀細胞、B細胞、T細胞、上皮細胞和神經元。利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質體核酸重新包裝到外泌體中。這可以通過靶向外泌體特異性的膜蛋白(如四跨蛋白和膜聯蛋白)并啟動脂質體和外泌體之間的融合事件來實現。青海轉染試劑靠譜評估轉染效率至關重要,特別是在需要高轉染效率以保證特定下游靶標轉錄后調控的功能研究中。
轉染是將外來核酸傳遞到真核細胞中以修飾宿主細胞的遺傳組成的過程。在過去的30年里,轉染因其廣泛應用于研究疾病的細胞過程和分子機制而越來越受歡迎。了解疾病的分子途徑,可以發現可能用于疾病診斷和預后的特定生物標志物。此外,轉染可以作為基因***中的策略之一,用于***無法***的遺傳性遺傳病。***,生命科學技術的進步允許將不同類型的核酸轉染到哺乳動物細胞中,這些核酸包括脫氧核糖核酸(DNA),核糖核酸(RNA)以及小的非編碼RNA,如siRNA,shRNA和miRNA。通常轉染可分為穩定轉染和瞬時轉染兩種類型。穩定轉染是指通過將外源DNA整合到宿主核基因組中,或在宿主核中作為染色體外元件維持一個外源載體來維持轉基因的長期表達。該轉基因可然后通過細胞的復制進行本構性表達。相比之下,瞬時轉染不需要將核酸整合到宿主細胞基因組中。核酸可以以質粒的形式或寡核苷酸的形式轉染。因此,隨著宿主細胞的復制,轉基因表達**終會丟失。瞬時轉染通常用于短期研究,以研究特定基因敲入/敲入的影響。相比之下,穩定轉染在需要大規模蛋白質生產的長期遺傳和藥理學研究中很有用。
PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時,它可以與質粒DNA結合并凝聚成致密顆粒。研究人員發現,配體在PLL上的共價附著可通過受體介導的途徑***增強內吞作用。例如,涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體,在肝細胞上表達。當ASOR共價附著在PLL上時,受體介導的內吞作用和質粒的細胞攝取***增加。此外,與葉酸或轉鐵蛋白相關的PLL已被開發出來,并在將pDNAs轉染到*細胞中取得了實質性進展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥氨酸)。PLO具有PLL的特性,但轉染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明,與PLL相比,PLO以更低的電荷(+/?)比率凝聚pDNA,并且在相同的多陽離子/pDNA質量比下,PLO/pDNA復合物比PLL/pDNA復合物更耐破壞。然而,由于其介導內體逃逸的能力較差,帶正電的多氨基酸的轉染效率仍然很低。轉染是將外來核酸傳遞到真核細胞中以修飾宿主細胞的遺傳組成的過程。
核酸與轉染試劑的比例對轉染效率也有影響。在一項涉及原代人成肌細胞的研究中,使用不同的核酸比例來比較轉染效率的影響,轉染試劑包括FuGENE6、Effectene和ExGen500(一種基于pei的試劑)。該研究的一個***發現是,轉染效率可能不一定與所用試劑的體積直接相關。例如,2μgDNA與5μLFuGENE6試劑的比例被證明可以產生比較好的轉染效率,而更低或更高的DNA與試劑的比例并不能提高效率。在另一項涉及轉染人胃腺*細胞系的研究中也觀察到類似的發現,即在一系列組合中使用比較高轉染試劑與DNA比體積測試時,轉染效率并未達到比較好。使用不成比例的高轉染試劑量會導致不必要的細胞毒性,從而降低整體轉染結果。因此,確定合適的核酸與試劑比例是啟動新的轉染研究以實現高轉染效率和低細胞毒性的重要步驟。研究已經確定了陽離子脂質體(CLs)的某些特征,這些特征增強了它們在體內轉運核酸的能力。內蒙古轉染試劑靠譜
影響物理轉染或機械轉染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。上海脂質體轉染試劑
基因注射包括通過注射將所需的核酸物質直接輸送到宿主細胞核中。當細胞轉染具有挑戰性時,特別是當需要對宿主細胞進行遺傳修飾時,這種方法是一種很好的替代方法。與其他非病毒基因傳遞方法一樣,沒有一種方法可以適用于所有不同的細胞類型,選擇合適的細胞類型和核酸大小對于確保基因注射的成功至關重要。例如,先前的一項研究報道了成功生成表達cre重組酶(大小~1,000bp)的轉基因小鼠細胞系。另一方面,在一項體內研究中,表達轉基因的小鼠肌纖維數量與注射次數和給藥質粒劑量相關。另一項體外研究進一步支持了這一觀點,該研究報道了表達報告基因的宿主細胞的數量與注入細胞的核酸量密切相關。此外,微針的大小、形狀和額外涂層的存在也會影響基因注射的效率,因為有報道稱,涂有微顆粒的小尺寸微針(<10毫米)能夠順利地將所需的貨物輸送到皮膚的角質層。上海脂質體轉染試劑