小動物***成像技術（invivoimagingtechnology）是利用高靈敏度的光學檢測儀器直接檢測動物***體內的細胞活動和基因行為研究的一類技術，是近年來發展**快的生命科學研究方法，是**直接觀察細胞和分子在體內行為的新興技術，已廣泛應用于生命科學研究的各個領域[1]。***動物體內光學成像主要采用生物發光與熒光發光兩種技術。生物發光是利用熒光素酶報告基因在***內表達產生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發生化學反映產生熒光。而熒光發光成像技術是將熒光物質或熒光物質標記的小分子物質如基因、細胞也可是小分子藥物、抗體、納米材料等導入到***體內，通過小動物***成像系統的激發光源激發熒光集團到達高能量狀態，而后產生波長較激發光長的發射光，然后通過高靈敏度制冷CCD鏡頭探測到***內的發射光。通過***成像技術可以觀測***動物體內**的生長和轉移、炎癥的發生、特定基因的表達和藥物作用效果等生物學過程。5(6)-FITC (Fluorescein 5(6)-isothiocyanate) 是一種胺活性衍生物的熒光染料.山西細胞核熒光染料

羅丹明123一種可對活細胞線粒體染色的細胞染色試劑。羅丹明123可透過細胞膜且在活細胞的線粒體內聚集，并發出黃綠色熒光。羅丹明123***用作檢測線粒體膜電位，也常用于細胞凋亡檢測。由于細胞內ATP的量與羅丹明123的熒光強度之間有相關性，此熒光染料被應用于檢測細胞內的ATP。羅丹明123的比較大激發波長為507nm，比較大發射波長為525nm。在熒光顯微鏡下觀察，呈現黃綠色熒光。

一：工作液配制用緩沖液或者預熱的培養液直接稀釋儲存液到需要的工作液濃度（1～20μM），充分混勻。具體的工作液濃度使用者要根據自身實驗體系進行調整。【注意】：對于細胞實驗，要控制好總體稀釋倍數，DMSO在培養液中的濃度不能超過0.1%，以避免DMSO對細胞的影響。

二：熒光顯微鏡觀察1、用載玻片準備細胞。細胞數目應為5×104～5×105個/mL。2、在載玻片上孵育細胞，用PBS或HBSS洗滌細胞。3、將Rhodamine123工作液加入載玻片并在37℃下孵育30min至1小時。4、去除Rhodamine123溶液并用培養液洗滌細胞（洗滌細胞后如果要固定，加入10%福爾馬林緩沖液并孵育15～20min，接著用PBS洗滌）。5、熒光顯微鏡觀察細胞。 廣州熒光染料Cy5D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物，存在于多種發光生物體中。

Hoechst33258是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低。用于細胞核染色時，推薦的Hoechst33258工作濃度為0.5-10μg/ml。儲存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。注意事項：Hoechst33258對人體有害，請注意適當防護。熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。抗熒光淬滅封片液(P0126)可以向碧云天訂購。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作注意事項：Hoechst33342對人體有一定刺激性，請注意適當防護。熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

二、***成像分析：D-熒光素，鉀鹽，D-PBS,不含鈣、鎂1、配制溶液使用無菌D-PBS（w/oCa2+;Mg2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液（15mg/ml），0.22μm濾膜過濾除菌（避光），分裝后于-20℃或-80℃冷凍保存，避免反復凍融。使用時4℃融化，實驗前平衡至室溫（避光）2、注射量取決于注射方式，具體如下：注射方式劑量靜脈注射（25-27gauge針頭）按10μl/g體重濃度，加入相應體積的15mg/ml熒光素工作液腹腔注射（25-27gauge針頭）按10μl/g體重濃度，加入相應體積的15mg/ml熒光素工作液肌肉注射（27gauge針頭）50μl，濃度為1-2mg/ml熒光素工作液鼻內注射（pipette）50μl，濃度為3mg/ml熒光素工作液3、注射入體內10-20min（待光信號達到**強穩定平臺期），再進行成像分析熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。

1.DiD，DiO，DiI，DiR和DiS細胞膜染色液制備（1）配置DMSO或EtOH儲存液：儲存液用DMSO或EtOH配置濃度1～5mM。注意：未使用的儲存液保存在-20°C，避免反復凍融。（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5μM的工作液。注意：工作液的**終濃度是根據不同細胞和實驗的經驗來配制。可以從推薦濃度的十倍以上尋找比較好條件。

2.懸浮細胞染色（1）懸浮細胞密度為1×106/mL加入到工作液中。（2）在37℃培養細胞2～20分鐘，不同的細胞比較好培養時間不同。（3）染色細胞試管在1000～1500轉離心5分鐘。（4）傾倒上清液，再次緩慢加入預溫37℃的培養液。（5）重復（3），（4）步驟兩次以上。 熒光染料，由于靈敏度高，操作方便，逐漸取代了放射性同位素作為檢測標記，其應用于熒光探針，細胞染色等。吉林熒光染料細胞核

Cy3 (Cyanine 3) 是一種發橘黃色熒光的花青素熒光染料。山西細胞核熒光染料

PI是一種可對DNA染色的細胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。常用于細胞凋亡(apoptosis)或細胞壞死(necrosis)的檢測，常用于流式細胞儀分析。盡管PI不能通過活細胞膜，但卻能穿過破損的細胞膜而對核染色。PI經常被用來與Calcein,AM、Hoechst33258或Hoechst33342等一起使用，能同時對活細胞和死細胞染色。PI-DNA復合物的激發和發射波長分別為535nm和615nm。2.染色過程（1）將1/10培養基體積的PI染色液加入到細胞培養基中（也可以用1/10濃度的PI緩沖液代替培養基）。（2）在37℃培養細胞10～20分鐘。（3）用PBS或合適的緩沖液洗滌細胞兩次。（4）用535nm激發波長，615nm發射波長的濾光器的熒光顯微鏡觀察細胞。儲存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。注意事項：PI對人體有刺激性，請注意適當防護。山西細胞核熒光染料