5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一種胺活性衍生物的熒光染料，具有廣泛的應用，作為抗體和其他探針標記，用熒光顯微鏡，流式細胞儀、免疫熒光方法如ELISA和Western印跡實驗。熒光素衍生物具有高吸收率、優異的熒光量子產率和良好的水溶性，是流式細胞儀和免疫熒光中生物檢測**常用的熒光標記之一。**常用的熒光素包括用于標記蛋白質（特別是抗體）的異硫氰酸熒光素[5(6)-FITC)]，5-FITC和用于標記肽和寡核苷酸的羧基熒光素（5-FAM和5(6)-FAM）。BIOFOUNT提供***的基于熒光素的染料、底物和偶聯物，以及一系列具有針對細胞標記和檢測優化的特性的質量iFluor?熒光標記染料。D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲產生典型的黃綠色光。高分子熒光染料細胞膜

PI是一種可對DNA染色的細胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。常用于細胞凋亡(apoptosis)或細胞壞死(necrosis)的檢測，常用于流式細胞儀分析。盡管PI不能通過活細胞膜，但卻能穿過破損的細胞膜而對核染色。PI經常被用來與Calcein,AM、Hoechst33258或Hoechst33342等一起使用，能同時對活細胞和死細胞染色。PI-DNA復合物的激發和發射波長分別為535nm和615nm。2.染色過程（1）將1/10培養基體積的PI染色液加入到細胞培養基中（也可以用1/10濃度的PI緩沖液代替培養基）。（2）在37℃培養細胞10～20分鐘。（3）用PBS或合適的緩沖液洗滌細胞兩次。（4）用535nm激發波長，615nm發射波長的濾光器的熒光顯微鏡觀察細胞。儲存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。注意事項：PI對人體有刺激性，請注意適當防護。南京熒光染料Cy7DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見的細胞膜染料，它們是一族親脂性的熒光染料，用于細胞的形態學和結構研究。

與花青和羅丹明染料一樣，熒光素也是一種有機染料。熒光素的比較大吸收波長為494nm，比較大發射波長為521nm（通常吸收藍色范圍內的光并發射綠色范圍內的光），熒光素是一種高熒光物質。即使在非常少量的情況下也可以檢測到它，并且在與抗體結合時用于顯微鏡檢查。熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。與許多其他熒光染料一樣，熒光素價格低廉且易于使用，使其成為生物學研究中很受歡迎的染料之一。與大多數其他染料不同，熒光素在水溶液中是無毒的。因此，它是極少數用作地下水示蹤劑的染料之一。

異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate，FITC）：FITC是應用*為***的一種熒光素，經激光激發后發出明亮的黃綠色熒光，*大發射波長為525nm。FITC的熒光強度受PH影響較大，常隨著PH的降低而減弱，因此，在使用FITC時需格外注意溶液的酸堿度。a)電泳分離后的蛋白質檢測(b)蛋白質和肽的微測序分析(c)使用毛細管區帶電泳進行分子分析(d)生物相互作用中的分子跟蹤和檢測(e)細胞和組織切片中的抗原檢測(f)通過標記DNA片段進行細胞凋亡檢測除了因其在水中的溶解性而易于用于偶聯物制備外，異硫氰酸熒光素還具有明亮的熒光（由于偶聯后的大消光系數和高量子產率），使其成為許多工藝的優先染料。在流式細胞術和免疫熒光顯微術中，染料與各種抗體（一抗或二抗）結合，以檢查和研究IL-17免疫缺陷和CD63在腎功能中的作用等狀態。作為熒光素的衍生物，異硫氰酸熒光素含有一個異硫氰酸酯反應基團，這有助于其對通常存在于生物分子中的動漫和巰基基團具有反應性。Cy5.5含有一個游離胺基,可與多種官能團共軛,包括NHS酯和環氧化合物。

羅丹明123一種可對活細胞線粒體染色的細胞染色試劑。羅丹明123可透過細胞膜且在活細胞的線粒體內聚集，并發出黃綠色熒光。羅丹明123***用作檢測線粒體膜電位，也常用于細胞凋亡檢測。由于細胞內ATP的量與羅丹明123的熒光強度之間有相關性，此熒光染料被應用于檢測細胞內的ATP。羅丹明123的比較大激發波長為507nm，比較大發射波長為525nm。在熒光顯微鏡下觀察，呈現黃綠色熒光。

一：工作液配制用緩沖液或者預熱的培養液直接稀釋儲存液到需要的工作液濃度（1～20μM），充分混勻。具體的工作液濃度使用者要根據自身實驗體系進行調整。【注意】：對于細胞實驗，要控制好總體稀釋倍數，DMSO在培養液中的濃度不能超過0.1%，以避免DMSO對細胞的影響。

二：熒光顯微鏡觀察1、用載玻片準備細胞。細胞數目應為5×104～5×105個/mL。2、在載玻片上孵育細胞，用PBS或HBSS洗滌細胞。3、將Rhodamine123工作液加入載玻片并在37℃下孵育30min至1小時。4、去除Rhodamine123溶液并用培養液洗滌細胞（洗滌細胞后如果要固定，加入10%福爾馬林緩沖液并孵育15～20min，接著用PBS洗滌）。5、熒光顯微鏡觀察細胞。 Super Flour 系列在生物熒光領域已逐漸替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等熒光染料。上海武漢熒光染料

染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一類親脂性熒光染料家族，用于標記細胞膜和疏水性組織。高分子熒光染料細胞膜

小動物***成像技術（invivoimagingtechnology）是利用高靈敏度的光學檢測儀器直接檢測動物***體內的細胞活動和基因行為研究的一類技術，是近年來發展**快的生命科學研究方法，是**直接觀察細胞和分子在體內行為的新興技術，已廣泛應用于生命科學研究的各個領域[1]。***動物體內光學成像主要采用生物發光與熒光發光兩種技術。生物發光是利用熒光素酶報告基因在***內表達產生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發生化學反映產生熒光。而熒光發光成像技術是將熒光物質或熒光物質標記的小分子物質如基因、細胞也可是小分子藥物、抗體、納米材料等導入到***體內，通過小動物***成像系統的激發光源激發熒光集團到達高能量狀態，而后產生波長較激發光長的發射光，然后通過高靈敏度制冷CCD鏡頭探測到***內的發射光。通過***成像技術可以觀測***動物體內**的生長和轉移、炎癥的發生、特定基因的表達和藥物作用效果等生物學過程。高分子熒光染料細胞膜