在選擇合適的小RNA分子進行轉染相關功能分析之前，應先確定其實驗需要。例如，siRNA*對一個靶標具有高度特異性，而miRNA具有調節多個下游靶標的潛力。如今，可以人工合成各種類型的短長度寡核苷酸來模仿小RNA分子，以研究這些小RNA分子的敲入/敲入/敲出效應。常用的寡核苷酸可分為模擬物或拮抗劑。模擬物是一種基于rna的小寡核苷酸(可能是piRNA、miRNA或siRNA)，其結構使其能夠與目標mRNA結合以抑制其功能，從而導致特定基因的翻譯抑制。相反，拮抗劑是一種寡核苷酸，它將與互補的小RNA鏈(如miRNA)結合以拮抗其活性，從而增加目標基因的表達。陽離子聚合物是一種非病毒載體。湖北轉染試劑優惠

選擇合適的轉染試劑可能取決于幾個因素，包括轉染核酸的類型和轉染的復雜性(單轉染或共轉染)。一些試劑如Effectene和TransIT-X2是專門用于質粒DNA轉染的，而一些試劑如Lipofectamine RNAiMAX更適合于小寡核苷酸的轉染。哺乳動物原代細胞由于其有限的壽命和有限的擴增能力，通常比其他細胞類型更不容易受到轉染。非脂質體試劑在轉染人原代細胞方面優于脂質體試劑，包括PEC、HASMC和HAEC、人原代成肌細胞和AGS。相比之下，據報道，基于脂質體的試劑(如Lipofectamine和DharmaFECT家族)在轉染其他原代人細胞(如原代臍帶靜脈內皮細胞(HUVEC)和BM-MSC方面比非脂質體試劑產生更高的轉染效率。山東北京轉染試劑deae-葡聚糖是一種化學修飾的葡聚糖類似物。

PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時，它可以與質粒DNA結合并凝聚成致密顆粒。研究人員發現，配體在PLL上的共價附著可通過受體介導的途徑***增強內吞作用。例如，涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體，在肝細胞上表達。當ASOR共價附著在PLL上時，受體介導的內吞作用和質粒的細胞攝取***增加。此外，與葉酸或轉鐵蛋白相關的PLL已被開發出來，并在將pDNAs轉染到*細胞中取得了實質性進展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥氨酸)。PLO具有PLL的特性，但轉染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明，與PLL相比，PLO以更低的電荷(+/?)比率凝聚pDNA，并且在相同的多陽離子/pDNA質量比下，PLO/pDNA復合物比PLL/pDNA復合物更耐破壞。然而，由于其介導內體逃逸的能力較差，帶正電的多氨基酸的轉染效率仍然很低。

不同種類的納米顆粒轉染細胞系后，產生不同的效率、毒性和組織特異性。這些大量的測試表明，納米顆粒作為載體的效率與普通的非病毒轉染方法相當。Tabatt等人所做的研究比較了使用脂質體、陽離子固體li-pid納米顆粒和兩種商用轉染劑對COS-1細胞系(非洲綠猴腎成纖維細胞樣細胞)使用四種不同的轉染介質所取得的轉染效果。固體脂質na-noparticles轉染組和溶酶體(均由DOTAP -N -(1-(2,3-二聚乙氧基)丙基)-N,N,N-三甲基硫酸銨)轉染組的熒光素酶基因表達效率沒有統計學上的***差異，在每種轉染介質中保持相同水平。然而，獲得的轉染效率低于使用商業轉染劑EscortTM 的效率，該轉染劑由DOPE(1,2-二-(順式-9-十八烷基)- n-甘油-3-磷酸乙醇胺)組成。研究人員通過在HepG2細胞(人肝細胞肝*細胞系)上使用固體脂質納米顆粒，實現了與市買的lipo-fectamine相同的綠色熒光蛋白和熒光素酶蛋白表達水平。不同種類的納米顆粒轉染細胞系后，產生不同的效率、毒性和組織特異性。

影響物理轉染或機械轉染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。例如，電穿孔技術依賴于電場來增加宿主細胞膜的通透性，以內化外來核酸。因此，電穿孔過程中的電壓和持續時間是決定電穿孔成功與否的重要因素。施加高壓的長時間電穿孔可能會導致細胞損傷并降低轉染效率。通過增加電脈沖的數量也可以提高電轉染效率，但這可能會降低細胞活力。另一方面，電轉染效率取決于所使用的細胞類型，每當要電轉染一種新的細胞類型時，應優化電穿孔條件。一些細胞如T淋巴細胞，即使在標準的電穿孔條件下也可能轉染不良，而電轉染成纖維細胞通常可以產生良好的轉染結果。電穿孔緩沖液的組成是影響轉染效率的另一個關鍵參數。據報道，電穿孔緩沖液中的ATP酶抑制劑如利多卡因可提高電穿孔后的細胞活力，而使用K+-based緩沖液的轉染效率優于Mg2+-based緩沖液。假設Mg2+離子在***ATP酶以恢復電穿孔后的離子穩態中發揮關鍵作用，以比較大限度地減少細胞死亡，但可能會降低轉染效率。因此，應優化由多種成分組成的合適的電穿孔緩沖液配方，以確保轉染效率和電穿孔后細胞活力之間的平衡。流式細胞術可以更精確地定量表達特定熒光基因的細胞，以評估轉染效率。海南DOTAP 轉染試劑

PEI的分子量對細胞毒性和基因轉移活性有影響。湖北轉染試劑優惠

化學轉染可分為基于脂質體或非基于脂質體。基于脂質體的轉染試劑是一種化學物質，它能夠形成帶正電的脂質聚集體，這些聚集體可以與宿主細胞的磷脂雙分子層順利融合，從而允許外來遺傳物質以**小的阻力進入。另一方面，非脂質體轉染試劑可進一步分為幾類，包括磷酸鈣、樹狀大分子、聚合物、納米顆粒和非脂質體。磷酸鈣是轉染中使用的低價的化學物質之一，轉染涉及將帶正電的鈣離子(Ca2+)與帶負電的核酸結合，形成沉淀，然后被宿主細胞吸收。然而，磷酸鈣轉染的成功率較低，需要事先優化才能達到較高的轉染效率。樹狀大分子是三維的、高度支化的有機大分子，可以與核酸形成復合物，作為一種替代的非脂質體轉染試劑，它優于磷酸鈣。然而，使用樹狀大分子的轉染效率仍然低于病毒載體和脂質體試劑。陽離子聚合物也可以與帶負電荷的核酸形成復合物，這有助于細胞通過內吞作用吸收遺傳物質。與病毒載體相比，陽離子聚合物產生的細胞毒性較小，但效率也較低。納米顆粒由于其體積小，增強了核酸進入宿主細胞的能力，正在成為非脂質體轉染的替代選擇。湖北轉染試劑優惠