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小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng)?來(lái)源不同:胎牛血清 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過(guò)心臟穿刺獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清采自出生10至14 天的小牛。組份與比例不同:兩者所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子、及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,用途與用法不同...
膜片鉗使用的注意事項(xiàng):工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對(duì)相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。它的基本原理是以一個(gè)光潔,直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經(jīng)或肌細(xì)胞的膜接觸,之后對(duì)微電極另一端開口處施加適當(dāng)?shù)呢?fù)壓用電極的纖細(xì)開口...
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的循環(huán)參數(shù):預(yù)變性,模板DNA完全變性與PCR酶的完全對(duì)PCR能否成功至關(guān)重要,建議加熱時(shí)間參考試劑說(shuō)明書,一般未修飾的Taq酶時(shí)間為兩分鐘。變性步驟,循環(huán)中一般95℃,30秒足以使各種靶DNA序列完全變性,可能的情況下可縮短該步驟時(shí)間。變性時(shí)間...
膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:全細(xì)胞式膜片方式使細(xì)胞內(nèi)與浴槽之間的漏流極少。電極本身阻抗(1~10mω)與細(xì)胞封接后的阻抗相比較低,這種低接觸阻抗使單管電壓鉗容易實(shí)現(xiàn)。電極管內(nèi)與細(xì)胞之間彌散交換與平衡快,因而容易控制細(xì)胞內(nèi)液的成分。細(xì)胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有...
膜片鉗技術(shù)的基本原理和方法:膜片鉗使用的基本方法是,把經(jīng)過(guò)加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下,與清潔處理過(guò)的細(xì)胞膜形成高阻抗封接,導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來(lái),由于電性能隔離與微電極的相對(duì)低電阻(1~5MΩ),只要對(duì)微電極施以電壓就...
膜片鉗使用的基本方法是,把經(jīng)過(guò)加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下,與清潔處理過(guò)的細(xì)胞膜形成高阻抗封接,導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來(lái),由于電性能隔離與微電極的相對(duì)低電阻(1~5MΩ),只要對(duì)微電極施以電壓就能對(duì)膜片進(jìn)行鉗制,從微電極引...
膜片鉗技術(shù)原理:膜片鉗技術(shù)的建立,對(duì)生物學(xué)科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過(guò)離子通道的離子電流來(lái)反映細(xì)胞膜單一的(或多個(gè)的離子通道分子活動(dòng)的技術(shù)。些技術(shù)的出現(xiàn)自然將細(xì)胞水平和分子水平的生理學(xué)研究聯(lián)系在一起,同時(shí)又將神經(jīng)科學(xué)的不同分野必...
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種在體外快速擴(kuò)增特定基因或DNA序列的方法,故又稱為基因的體外擴(kuò)增法。PCR技術(shù)類似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR能快速特異擴(kuò)增任何已知目的基因或DN段,并能輕易在皮克(pg)水平起始DNA混合物...
在體監(jiān)測(cè)基因療于中的基因表達(dá),隨著 后基因組時(shí)代的到來(lái)和人們對(duì)疾病發(fā)生的發(fā)展機(jī)制的深入了解, 在基因水平上療于壞掉的、 心血管疾病、 和分子遺傳病等惡性疾病已經(jīng)得到國(guó)內(nèi)外研究人員越來(lái)越 較多的關(guān)注。如何客觀地檢測(cè)基因療于的臨床療效判斷終點(diǎn), 有效監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)基因在生...
胎牛血清的合規(guī)血源產(chǎn)地對(duì)于細(xì)微差異即可決定成敗的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)來(lái)說(shuō),選擇來(lái)源安全、品質(zhì)優(yōu)良的胎牛血清至關(guān)重要。作為牛肉制品的副產(chǎn)品,胎牛血清的傳統(tǒng)產(chǎn)地包括澳大利亞,新西蘭, 美國(guó), 南美(烏拉圭&巴西)以及歐洲等畜牧業(yè)發(fā)達(dá)的區(qū)域。業(yè)內(nèi)通常會(huì)根據(jù)不同產(chǎn)地的牛情況,...
膜片鉗技術(shù)是用于紀(jì)錄全細(xì)胞或個(gè)別細(xì)胞膜上離子信道電生理特性的研究方法,目的在于提供基礎(chǔ)研究知識(shí)與新藥開發(fā)時(shí)研究細(xì)胞電特性或小分子藥物對(duì)細(xì)胞膜上離子信道特性的影響,替開發(fā)標(biāo)靶藥物提供一個(gè)測(cè)試平臺(tái)。傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)膜片鉗系統(tǒng)由人工操作,實(shí)驗(yàn)人員在取得元代細(xì)胞(例如心...
基于聚合酶鏈反應(yīng)的遺傳(或脫氧核糖核酸)指紋圖譜協(xié)議的發(fā)展已在法醫(yī)學(xué)中得到較廣應(yīng)用:遺傳指紋以其辨別力的形式,可以從世界上所有人群中獨(dú)特地區(qū)分任何一個(gè)人。微小的DNA樣本可以從犯罪現(xiàn)場(chǎng),和比較的從嫌疑人那里,或者從DNA資料庫(kù)早期的證據(jù)或罪犯。這些測(cè)試的簡(jiǎn)單版...
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)準(zhǔn)備:引物內(nèi)部不應(yīng)出現(xiàn)互補(bǔ)序列。兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列,尤其是避免3 ′端的互補(bǔ)重疊。引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不要超過(guò)70%,引物3′末端連續(xù)8個(gè)堿基在待擴(kuò)增區(qū)以外不能有完全互補(bǔ)序列,否則易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。引物3‘端的堿基,特別是...
膜片鉗電生理記錄技術(shù):膜片鉗技術(shù)的基本原理:膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級(jí),因此封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。然后對(duì)該膜片實(shí)行電壓鉗位,測(cè)量單個(gè)離子通道開放產(chǎn)生的微小電流,這種...
聚合酶鏈反應(yīng)同時(shí)擴(kuò)增單個(gè)精子中幾個(gè)基因座的能力]增強(qiáng)了極大地增強(qiáng)了通過(guò)研究減數(shù)分裂后染色體交叉來(lái)進(jìn)行基因定位的傳統(tǒng)任務(wù)。通過(guò)分析數(shù)千個(gè)單個(gè)精子,已經(jīng)直接觀察到非常緊密基因座之間罕見(jiàn)的交叉事件。類似地,可以分析異常的缺失、插入、易位或倒位,所有這些都無(wú)需等待(或...
膜片鉗使用的基本方法是,把經(jīng)過(guò)加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下,與清潔處理過(guò)的細(xì)胞膜形成高阻抗封接,導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來(lái),由于電性能隔離與微電極的相對(duì)低電阻(1~5MΩ),只要對(duì)微電極施以電壓就能對(duì)膜片進(jìn)行鉗制,從微電極引...
在體光纖成像記錄的工作原理是將光源入射的光束經(jīng)由光纖送入調(diào)制器,在調(diào)制器內(nèi)與外界被測(cè)參數(shù)的相互作用, 使光的光學(xué)性質(zhì)如光的強(qiáng)度、波長(zhǎng)、頻率、相位、偏振態(tài)等發(fā)生變化,成為被調(diào)制的光信號(hào),再經(jīng)過(guò)光纖送入光電器件、經(jīng)解調(diào)器后獲得被測(cè)參數(shù)。整個(gè)過(guò)程中,光束經(jīng)由光纖導(dǎo)入...
膜片鉗使用的基本方法是,把經(jīng)過(guò)加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下,與清潔處理過(guò)的細(xì)胞膜形成高阻抗封接,導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來(lái),由于電性能隔離與微電極的相對(duì)低電阻(1~5MΩ),只要對(duì)微電極施以電壓就能對(duì)膜片進(jìn)行鉗制,從微電極引...
一種電生理膜片鉗灌流裝置的制造方法:為了測(cè)量在不同藥物對(duì)細(xì)胞中的離子通道的影響,通常需要在膜片鉗實(shí)驗(yàn)中實(shí)施灌流。例如,需要檢驗(yàn)?zāi)撤N是否對(duì)某種離子通道的影響,則需要在細(xì)胞封接后記錄電流數(shù)據(jù),然后通過(guò)在細(xì)胞周圍快速給藥再次記錄電流數(shù)據(jù)即可對(duì)比數(shù)據(jù)判斷該對(duì)離子通道的...
在體光纖成像記錄就是生物樣本的造影技術(shù),依照樣本尺度大小可以概分為組織造影與細(xì)胞分子的顯微技術(shù)。這些大致都需要光學(xué)技術(shù)配合生物樣本的特性發(fā)展,少數(shù)會(huì)使用光以外的波動(dòng)性質(zhì)將圖像光信號(hào)變?yōu)殡娦盘?hào)的器件,它是利用少數(shù)載流子的注入、存儲(chǔ)和轉(zhuǎn)移等物理過(guò)程來(lái)完成幾種電路功...
不同產(chǎn)地的胎牛血清,品質(zhì)也是相差甚遠(yuǎn)。值得注意的是,胎牛血清是動(dòng)物源生物制品,我國(guó)對(duì)于動(dòng)物源制品的進(jìn)口一直有很嚴(yán)格的規(guī)定,目前我國(guó)批準(zhǔn)進(jìn)口的胎牛血清來(lái)源是澳大利亞、新西蘭和烏拉圭,合法正規(guī)途徑進(jìn)口的胎牛血清必須在產(chǎn)品包裝上標(biāo)注血源地。這意味著,其他血源地的胎牛...
在體光纖成像記錄的優(yōu)點(diǎn)可以非侵入性,實(shí)時(shí)連續(xù)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)體內(nèi)的各種生物學(xué)過(guò)程,從而可以減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量,及降低個(gè)體間差異的影響;由于背景噪聲低,所以具有較高的敏感性;不需要外源性激發(fā)光,避免對(duì)體內(nèi)正常細(xì)胞造成損傷,有利于長(zhǎng)期觀察;此外還有無(wú)放射性等其他優(yōu)點(diǎn)。然而生...
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的試驗(yàn)污染:PCR反應(yīng)的很大特點(diǎn)是具有較大擴(kuò)增能力與極高的靈敏性,但令人腦袋不適的問(wèn)題是易污染,極其微量的污染即可造成假陽(yáng)性的產(chǎn)生。 污染原因:標(biāo)本間交叉污染:標(biāo)本污染主要有收集標(biāo)本的容器被污染,或標(biāo)本放置時(shí),由于密封不嚴(yán)溢于容器外,或容器外粘有...
我們知道,在體光纖成像記錄屬于單個(gè)原子的核外電子可以在不同能級(jí)之間躍遷。而對(duì)于無(wú)機(jī)閃爍體,電子可以在相鄰原子之間轉(zhuǎn)移,電子不再屬于某一個(gè)固定的原子,而是歸整個(gè)晶體共有,單個(gè)電子的能級(jí)也就演變成了晶體的電子能帶。晶體能帶的低能級(jí)為價(jià)帶,高能級(jí)為導(dǎo)帶。當(dāng)γ射線入射...
在體光纖成像記錄在自由活動(dòng)動(dòng)物的深部腦區(qū)實(shí)現(xiàn)光信號(hào)記錄和神經(jīng)細(xì)胞活性調(diào)控;高質(zhì)量,亞細(xì)胞分辨率的成像;多波長(zhǎng)成像,實(shí)現(xiàn)較多的鈣離子成像(GCaMP or RCaMP),和光遺傳實(shí)驗(yàn),特定目標(biāo)光刺激;在體光纖成像系統(tǒng)是模塊化設(shè)計(jì),使用者擁有很高的靈活性,可以隨時(shí)...
膜片鉗電生理紀(jì)錄系統(tǒng)及記錄方法:細(xì)胞膜由雙層脂膜組成,具有密封絕緣的特性,因此當(dāng)紀(jì)錄 電極接觸到細(xì)胞膜時(shí)電阻會(huì)開始上升,然后以人工方式對(duì)紀(jì)錄電極內(nèi)施加一個(gè)負(fù)壓,可以讓電極與胞膜之間吸附得更為緊密而電阻也會(huì)加速上升,當(dāng)紀(jì)錄電極的電阻達(dá)到千兆歐姆(Giga Ω)時(shí)...
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的試驗(yàn)污染:陽(yáng)性對(duì)照:在建立PCR反應(yīng)實(shí)驗(yàn)室及一般的檢驗(yàn)單位都應(yīng)設(shè)有PCR陽(yáng)性對(duì)照,它是PCR反應(yīng)是否成功、產(chǎn)物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個(gè)重要的參考標(biāo)志。陽(yáng)性對(duì)照要選擇擴(kuò)增度中等、重復(fù)性好,經(jīng)各種鑒定是該產(chǎn)物的標(biāo)本,如以重組質(zhì)粒為陽(yáng)性對(duì)...
膜片鉗使用的基本方法是,把經(jīng)過(guò)加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下,與清潔處理過(guò)的細(xì)胞膜形成高阻抗封接,導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來(lái),由于電性能隔離與微電極的相對(duì)低電阻(1~5MΩ),只要對(duì)微電極施以電壓就能對(duì)膜片進(jìn)行鉗制,從微電極引...
在體光纖成像記錄技術(shù)是在散射介質(zhì)(或稱為隨機(jī)介質(zhì))成像的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的,在散射介質(zhì)成像系統(tǒng)中,光經(jīng)過(guò)強(qiáng)散射介質(zhì)時(shí),由于介質(zhì)的隨機(jī)性或不均勻性,光發(fā)生散射后在輸出端形成散斑。當(dāng)光經(jīng)過(guò)光纖時(shí),多模光纖中不同模式的光產(chǎn)生隨機(jī)的相位延遲或者模間耦合導(dǎo)致光散射的產(chǎn)生,...
膜片鉗實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法:膜片鉗技術(shù)是電生理記錄的常用手段,目前在科學(xué)研究中使用越來(lái)越普遍。但在具體膜片鉗實(shí)驗(yàn)操作的過(guò)程中,總會(huì)遇到各種各樣的問(wèn)題,對(duì)實(shí)驗(yàn)人員造成很多困擾。本次講座主要從實(shí)驗(yàn)角度出發(fā),以簡(jiǎn)單,實(shí)用的原則,著重講解實(shí)驗(yàn)中遇到的各種問(wèn)題,以及解...