聚合酶鏈式反應的常見問題:靶序列或擴增產物的交叉污染:這種污染有兩種原因:一是整個基因組或大片段的交叉污染,導致假陽性。這種假陽性可用以下方法解決:操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣內或濺出離心管外。除酶及不能耐高溫的物質外,所有試劑或器材均應高壓消毒。所...
血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。它主要...
聚合酶鏈式反應是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。工具/原料:擴增緩沖液,四種dNTP,引物,模板DNA,Taq DNA聚合酶, Mg離子,蒸餾水。模板DNA的變性:模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解...
在體光纖成像記錄活細胞成像的安全性,對于被標記細胞的基因表達譜和蛋白質組進行分析,可以評估報告基因對細胞功能的干擾作用。小動物活的物體成像技術,活的物體動物成像技術的優勢,1、實現實時、無創的在體監測 2、發現早期病變,縮短評價周期3、評價更科學,準確、可靠4...
在體光纖成像記錄活細胞成像的安全性,對于被標記細胞的基因表達譜和蛋白質組進行分析,可以評估報告基因對細胞功能的干擾作用。小動物活的物體成像技術,活的物體動物成像技術的優勢,1、實現實時、無創的在體監測 2、發現早期病變,縮短評價周期3、評價更科學,準確、可靠4...
膜片鉗技術基本原理與特點:又由于玻璃微電極管徑很小,其下膜面積光約1 μm2,在這么小的面積上離子通道數量很少,一般只有一個或幾個通道,經這一個或幾個通道流出的離子數量相對于整個細胞來講很少,可以忽略,也就是說電極下的離子電流對整個細胞的靜息電位的影響可以忽略...
膜片鉗使用的基本方法是,把經過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下,與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接,導致電極內膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來膜片鉗技術實現的關鍵是建立高阻抗封接,并能通過特定的記錄儀器反映這些變化,記錄數據的過程,都需要細胞保...
聚合酶鏈式反應的常見問題:出現非特異性擴增帶:PCR擴增后出現的條帶與預計的大小不一致,或大或小,或者同時出現特異性擴增帶 與非特異性擴增帶。非特異性條帶的出現,其原因:一是引物與靶序列不完全互補、或引物聚合形成二聚體。二是Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低,...
避免產生沉淀物:請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,...
膜片鉗使用的基本方法是,把經過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下,與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接,導致電極內膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來,由于電性能隔離與微電極的相對低電阻(1~5MΩ),只要對微電極施以電壓就能對膜片進行鉗制,從微電極引...
血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。它主要...
在體光纖成像記錄應用:1、在體光纖成像記錄通過光學記錄特定細胞類型在自然狀態下的神經活動;2、實時觀測動物在進行復雜行為時的神經投射活動;3、闡明特殊的神經環路在動物行為中的作用;4、通過直接觀測和投射相關的神經環路的動態活動模式,整機一體化,輕巧便攜,集成信...
血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。它主要...
胎牛血清的合規血源產地對于細微差異即可決定成敗的細胞培養技術來說,選擇來源安全、品質優良的胎牛血清至關重要。作為牛肉制品的副產品,胎牛血清的傳統產地包括澳大利亞,新西蘭, 美國, 南美(烏拉圭&巴西)以及歐洲等畜牧業發達的區域。業內通常會根據不同產地的牛情況,...
聚合酶鏈式反應的循環參數:預變性,模板DNA完全變性與PCR酶的完全對PCR能否成功至關重要,建議加熱時間參考試劑說明書,一般未修飾的Taq酶時間為兩分鐘。變性步驟,循環中一般95℃,30秒足以使各種靶DNA序列完全變性,可能的情況下可縮短該步驟時間。變性時間...
小牛血清和胎牛血清有何區別與注意事項?來源不同:胎牛血清 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清采自出生10至14 天的小牛。組份與比例不同:兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子、及其他活性物質等組份與比例不同,用途與用法不同...
細胞培養是很多下游實驗的基礎,細胞培養的好壞會直接影響后續實驗的成功和穩定,而胎牛血清作為細胞培養的主要試劑對實驗的重要性不言而喻!胎牛血清是細胞培養中常用的天然培養基,因為胎牛未進食過母乳,所以IgG含量低,且含有豐富的細胞生長必須的營養成份,故目前多數實驗...
聚合酶鏈式反應:反應的控制:PCR反應的緩沖液 提供合適的酸堿度與某些離子;鎂離子濃度 總量應比dNTPs的濃度高,常用1.5mmol/L;底物濃度 dNTP以等摩爾濃度配制,20~200umol/L;TaqDNA聚合酶 2.5U(100ul);引物濃度一般為...
聚合酶鏈反應:流聚合酶鏈反應:一種偽等溫PCR方法。將溶液置于熱梯度下,而不是反復加熱和冷卻聚合酶鏈反應混合物。由此產生的熱不穩定性驅動對流流動自動將聚合酶鏈反應試劑從熱區域和冷區域打亂,從而反復啟動聚合酶鏈反應。通過利用混沌流場的出現,可以優化熱邊界條件和P...
膜片鉗技術與其他生物檢測技術的結合應用:1.膜片鉗與光學顯微成像技術結合應用:利用激光掃描共聚焦顯微鏡、雙光子顯微鏡、熒光顯微鏡等技術可以對細胞進行實時成像研究,將膜片鉗技術與光學顯微成像技術結合使用不但可以檢測細胞的電流變化情況,而且還可以對細胞的電信號傳遞...
胎牛顧名思義就是指還在母牛身體里的小牛,所以胎牛血清的采集工作,便是先從懷孕中的母牛身體里取出胎牛(通常5-8個月胎齡),之后對未發育完全的胎牛的心臟穿刺取血,完成的工作以后便再通過一系列的工藝處理獲得胎牛血清。而新生牛血清主要是采集已出生10天內的小牛,而且...
很好的胎牛血清對細胞成長的作用:提供細胞生長所需的天然或天然的生長因子。提供天然的結合蛋白,能識別氨基酸、脂質、金屬離子和等,能結合并調節它們的活性。已知清蛋白即具有上述功能,并對細胞代謝、生物合成、增殖和存活具有潛在的影響。又如胎牛血清中富含胎球蛋白,具有多...
聚合酶鏈式反應:DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈,在DNA聚合酶的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此...
膜片鉗的數據如何處理:穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規全細胞模式的胞質滲漏問題,有學者將與離子親和的制霉菌素或二性霉素b經微電極灌流到含有類甾醇的細胞膜上,形成只允許一價離子通過的孔,用此法在膜片上做很多導電性孔道,借此對全細胞膜電流進...
聚合酶鏈式反應的特點:靈敏度高:PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12)量級的起始待測模板擴增到微克(μg=-6)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中很小檢...
如何避免血清中產生沉淀?按如下操作可避免沉淀的產生:解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。血清分裝凍存時,須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝結而發生...
基于聚合酶鏈反應的遺傳(或脫氧核糖核酸)指紋圖譜協議的發展已在法醫學中得到較廣應用:遺傳指紋以其辨別力的形式,可以從世界上所有人群中獨特地區分任何一個人。微小的DNA樣本可以從犯罪現場,和比較的從嫌疑人那里,或者從DNA資料庫早期的證據或罪犯。這些測試的簡單版...
細胞培養中出現黑點是污染嗎?如何處理?一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養細胞生長的狀態,黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果...
未經檢疫的胎牛血清可能攜帶傳染性物質,一旦流入境內,將會對人民**的生命健康造成重大威脅,如可能帶有瘋牛病病毒、牛病毒性腹瀉病毒、牛細小病毒、狂犬病毒或其他傳染性物質,具有極高的檢疫風險。此外,不合格的血清對實驗的重復性、穩定性和真實性也會造成嚴重影響。無合格...
膜片鉗技術與其他生物檢測技術的結合應用:1.膜片鉗與光學顯微成像技術結合應用:利用激光掃描共聚焦顯微鏡、雙光子顯微鏡、熒光顯微鏡等技術可以對細胞進行實時成像研究,將膜片鉗技術與光學顯微成像技術結合使用不但可以檢測細胞的電流變化情況,而且還可以對細胞的電信號傳遞...