在體光纖成像記錄人類大量的復雜行為主要取決于上千億個神經元組成的精確神經環路,而神經環路的建立依賴于神經元之間突觸連接的形成。突觸是神經元交流的關鍵結構,只有通過突觸連接,神經元之間以及神經元和靶向細胞(包括肌肉,腺體分析的細胞)才能有效的傳遞信號,因此突觸連...
膜片鉗使用的注意事項:工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質分子對相應離子通透難易程度等特性的一種實驗技術。它的基本原理是以一個光潔,直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經或肌細胞的膜接觸,之后對微電極另一端開口處施加適當的負壓用電極的纖細開口...
聚合酶鏈反應的常見問題分析與解決方法:擴增產物出現多條帶(雜帶):引物用量偏大,引物的特異性不高。應調換引物或降低引物的使用量。循環的次數過多。適當增加模板的量,減少循環次數。酶的用量偏高或酶的質量不好,應降低酶量或調換另一來源的酶。退火溫度偏低,退火及延伸時...
膜片鉗技術本質上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區別關鍵在于:①膜電位固定的方法不同;②電位固定的細胞膜面積不同,進而所研究的離子通道數目不同。電壓鉗技術主要是通過保持細胞跨膜電位不變,并迅速控制其數值,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或...
小牛血清和胎牛血清有何區別與注意事項?來源不同:胎牛血清 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清采自出生10至14 天的小牛。組份與比例不同:兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子、及其他活性物質等組份與比例不同,用途與用法不同...
很好的胎牛血清:微生物,包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原毒等。隨著國內血清廠家生產條件的改善提高,細菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制,支原體經過0.1μm過濾,大多也能消除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴重的,主要是生產環境過程中帶入,又無法...
聚合酶鏈式反應:定量PCR允許實時定量和檢測特定的DNA序列,因為它在合成過程中測量濃度。有兩種方法可以同時檢測和定量。種方法是使用在DNA雙鏈之間非特異性保留的熒光染料。第二種方法涉及編碼特定序列并被熒光標記的探針。只有在探針與其互補DNA雜交后,才能使用這...
現在有些PCR因為擴增區很短,即使Taq酶活性不是很好也能在很短的時間內復制完成,因此可以改為兩步法,即退火和延伸同時在60℃-65℃間進行,以減少一次升降溫過程,提高了反應速度。檢測:PCR反應擴增出了高的拷貝數,下一步檢測就成了關鍵。熒光素(溴化乙錠,EB...
聚合酶鏈式反應的步驟:標準的PCR過程分為三步:DNA變性:(90℃-96℃):雙鏈DNA模板在熱作用下,氫鍵斷裂,形成單鏈DNA;退火:(60℃-65℃):系統溫度降低,引物與DNA模板結合,形成局部雙鏈。延伸:(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,...
膜片鉗技術基本原理與特點:又由于玻璃微電極管徑很小,其下膜面積光約1 μm2,在這么小的面積上離子通道數量很少,一般只有一個或幾個通道,經這一個或幾個通道流出的離子數量相對于整個細胞來講很少,可以忽略,也就是說電極下的離子電流對整個細胞的靜息電位的影響可以忽略...
膜片鉗使用的注意事項:1.向玻璃微電極灌注內液時切勿灌太多(1cm左右為適),以防液體進入銀絲底部增加噪聲。2.安裝玻璃微電極時,電極應與銀絲平行,防止刮蹭銀絲電極。3.玻璃微電極需先用甲醇浸泡,再用酒精燈微燒兩端,使其平滑。4.換液時應時刻觀察浴槽,防止液面...
在體光纖成像記錄可見光成像體內可見光成像包括生物發光與熒光兩種技術。生物發光是用熒光素酶基因標記DNA,利用其產生的蛋白酶與相應底物發生生化反應產生生物體內的光信號;而熒光技術則采用熒光報告基因(GFP、RFP)或熒光染料(包括熒光量子點)等新型納米標記材料進...
光纖成像技術具有損耗低、成本低等優勢,因此,光纖成像技術較多應用于生物醫學、激光技術等領域。早期的光纖成像系統采用多根單模光纖組成的光纖束收集圖像,每一根單模光纖用于收集一個像素點的圖像。包含較多的單模光纖,導致光纖束的直徑較大,因此,為了提高光纖成像系統的微...
在體光纖成像記錄的根本缺點是光的組織穿透率低。由于吸收和散射,熒光發射的可見光譜中的光只能穿透幾百微米的組織。這個問題限制了大多數光學方法在小動物或人類表面結構研究中的應用。使用近紅外光譜能夠提高信號的組織穿透能力,并能降低了組織的自體熒光。在體外將熒光探針與...
胎牛血清的主要成分:蛋白質類包括白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白(抑制胰蛋白酶的作用)、胎球蛋白(促進細胞附著)、轉鐵蛋白(能結合鐵離子,減少其毒性和被細胞利用)、纖維粘連素(促進細胞附著生長)等;多肽類,主要是一些促進細胞生長和分裂的生長因子,較為主要的生長因子...
膜片鉗的數據如何處理:1.內面向外式膜片細胞內外和電極內的溶液均可調控,既能較容易地改變細胞內的離子或物質濃度,又能把酶等直接加于膜的內側面,適宜研究胞內物質對通道活動的影響。但實驗中難以改變膜外側物質,且需浸于低鈣液中。常用于研究依賴細胞內鈣的離子通道,如鈣...
聚合酶鏈式反應的試驗污染:實驗室中克隆質粒的污染:在分子生物學實驗室及某些用克隆質粒做陽性對照的檢驗室,這個問題也比較常見。因為克隆質粒在單位容積內含量相當高,另外在純化過程中需用較多的用具及試劑,而且在活細胞內的質粒,由于活細胞的生長繁殖的簡便性及具有很強的...
不同產地的胎牛血清,品質也是相差甚遠。值得注意的是,胎牛血清是動物源生物制品,我國對于動物源制品的進口一直有很嚴格的規定,目前我國批準進口的胎牛血清來源是澳大利亞、新西蘭和烏拉圭,合法正規途徑進口的胎牛血清必須在產品包裝上標注血源地。這意味著,其他血源地的胎牛...
膜片鉗技術的基本原理和方法:膜片鉗使用的基本方法是,把經過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下,與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接,導致電極內膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來,由于電性能隔離與微電極的相對低電阻(1~5MΩ)只要對微電極施以電壓就能...
胎牛血清參與細胞培養實驗為細胞生長提供必要的營養成分,對于研究細胞的科學人士來說,血清都不會陌生,其中胎牛血清是實驗操作的??汀R话愣裕ヅQ迨侵笐言?-8個月的母牛被屠宰后,發育未完全的胎牛心臟穿刺后,通過一系列工藝處理獲得。此時胎牛血中含有特殊的生長發...
血清的保存應該注意:熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已完全解凍的血清。加熱過程中須規則搖晃均勻,此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活,除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物明顯增多,而且還會影響血清的質量,補體參與反...
在體光纖成像記錄的目的是實時檢測細胞的活性變化。基于鈣離子濃度變化的熒光成像技術被較多用來記錄神經元活性。在體光纖記錄方法與傳統的在體電生理記錄方法有著不同的特點,光纖記錄因其穩定、方便、易上手而應用較多。首先,將熒光蛋白表達在特定類型的神經元中,光纖記錄可以...
聚合酶鏈式反應的試驗污染:實驗室中克隆質粒的污染:在分子生物學實驗室及某些用克隆質粒做陽性對照的檢驗室,這個問題也比較常見。因為克隆質粒在單位容積內含量相當高,另外在純化過程中需用較多的用具及試劑,而且在活細胞內的質粒,由于活細胞的生長繁殖的簡便性及具有很強的...
在體光纖成像記錄對于成像結果的處理,需要依賴專業的圖像分析軟件,分割出目的信號和背景噪聲,獲得準確的熒光強度值。光學成像方法可分為基于熒光的方法和基于生物發光的方法。光學相對于設備小且較便宜?;畹奈矬w顯微成像的缺點是它的有創性,因為需要通過手術創造一個窗口來觀...
膜片鉗技術與其他生物檢測技術的結合應用:1.膜片鉗與光學顯微成像技術結合應用:利用激光掃描共聚焦顯微鏡、雙光子顯微鏡、熒光顯微鏡等技術可以對細胞進行實時成像研究,將膜片鉗技術與光學顯微成像技術結合使用不但可以檢測細胞的電流變化情況,而且還可以對細胞的電信號傳遞...
膜片鉗的數據如何處理:穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規全細胞模式的胞質滲漏問題,有學者將與離子親和的制霉菌素或二性霉素b經微電極灌流到含有類甾醇的細胞膜上,形成只允許一價離子通過的孔,用此法在膜片上做很多導電性孔道,借此對全細胞膜電流進...
膜片鉗技術的基本原理和方法:膜片鉗技術是在電壓鉗技術基礎上發展起來的,電壓鉗是利用負反饋技術將膜電位在空間和時間上固定于某一測定值,以研究動作電位產生過程中膜的離子通透性與膜電位之間的依從關系。但電壓鉗只能研究一個細胞上眾多通道的綜合活動規律,而無法反映單個通...
在體光纖成像記錄可見光成像體內可見光成像包括生物發光與熒光兩種技術。生物發光是用熒光素酶基因標記DNA,利用其產生的蛋白酶與相應底物發生生化反應產生生物體內的光信號;而熒光技術則采用熒光報告基因(GFP、RFP)或熒光染料(包括熒光量子點)等新型納米標記材料進...
在體光纖成像記錄,指的是利用光學的探測手段結合光學探測分子對細胞或者組織甚至生物體進行成像,來獲得其中的生物學信息的方法。傳統的動物實驗方法需要在不同的時間點處死實驗動物,以獲得多個時間點的實驗數據。而在體光纖成像記錄則可以對同一觀察目標進行連續的查看并記錄其...