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美國bruker多光子顯微鏡成像深度

來源: 發布時間:2024-09-10

1,光源、光路高度整合通過精密的設計,將飛秒激光器、掃描振鏡、PMT、濾光片組,甚至是單光子熒光光路全套整合在一個不大的掃描頭內,無論掃描頭如何移動,掃描頭內的光路都可以保持穩定不變,從而實現了超穩定、免維護的特點。2,配合多維度、高精度機械控制系統。掃描頭直接架設在一個多維運動的機械裝置上,可沿任意方向和角度移動掃描頭,方便對動物樣本進行多方位的掃描觀察。而這在常規方案的多光子顯微鏡上有很大的實現難度,不但需要多個關節組合的光路導向機構,并且在這些關節旋轉的時候,都冒著極大的光路偏移的風險,以至于在使用一段時間后都需要對光路進行再次校準,而這樣的問題在我司上則完全不會發生。3.一機多能。多光子顯微鏡是一款針對厚樣本進行深層成像的利器,特別是在實驗中。美國bruker多光子顯微鏡成像深度

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2020年,TonmoyChakraborty等人提出了一種加快2PM軸向掃描速度的方法[2]。在光學顯微鏡中,物鏡或樣品的緩慢軸向掃描速度限制了體積成像的速度。近年來,通過使用遠程聚焦技術或電可調諧透鏡(ETL)已經實現了快速軸向掃描;但是,遠程聚焦中反射鏡的機械驅動會限制軸向掃描速度,ETL會引入球面像差和更高階像差,從而無法進行高分辨率成像。為了克服這些局限性,該組引入了一種新穎的光學設計,能將橫向掃描轉換為可用于高分辨率成像的無球差的軸向掃描。該設計有兩種實現方式,第一種能夠執行離散的軸向掃描,另一種能夠進行連續的軸向掃描。具體裝置如圖3a所示,由兩個垂直臂組成,每個臂中都有一個4F望遠鏡和一個物鏡。遠程聚焦臂包含一個檢流掃描鏡(GSM)和一個空氣物鏡(OBJ1),另一個臂(稱為照明臂)由一個水浸物鏡(OBJ2)構成。將這兩個臂對齊,以使GSM與兩個物鏡的后焦平面共軛。準直的激光束被偏振分束器反射到遠程聚焦臂中,GSM對其進行掃描,進而使得OBJ1產生的激光焦點進行橫向掃描。Ultima Investigator多光子顯微鏡系統生產和消費的角度分析多光子顯微鏡的主要生產地區、主要消費地區以及主要的生產商。

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2020年,JianglaiWu等人提出提高2PM橫向掃描速率的裝置,稱為FACED(free-spaceangular-chirp-enhanceddelay)。圓柱透鏡將激光束一維聚焦,會聚角為Δθ。光束進入到一對幾乎平行的高反射鏡中,其間距為S,偏角為α。經過反射鏡多次反射后,激光脈沖被分成多個傳播方向不同的子脈沖(N=Δθ/α),脈沖間以2S/c的時間延遲(c,光速)回射。FACED模塊輸出處的子脈沖序列可以看作從虛擬光源陣列發出的光,這些子脈沖在中繼到顯微鏡物鏡后形成了一個空間上分離且時間延遲的焦點陣列。然后將該模塊并入具有高速數據采集系統的標準雙光子熒光顯微鏡中。光源是具有1MHz重復頻率的920nm的激光器,通過FACED模塊可產生80個脈沖焦點,其脈沖時間間隔為2ns。這些焦點是虛擬源的圖像,虛擬源越遠,物鏡處的光束尺寸越大,焦點越小。光束沿y軸比x軸能更好地充滿物鏡,從而導致x軸的橫向分辨率為0.82μm,y軸的橫向分辨率為0.35μm。

在多光子顯微鏡(也稱為非線性或雙光子顯微鏡)中,以兩倍正常激發波長照射樣品。更長的波長是有利的,因為它們可以更深地穿透樣品進行3D成像,并且因為它們不會損壞樣品,從而延長樣品壽命。為了實現多光子激發,照明光束在空間上聚焦(使用光學器件),同時使用高能短脈沖激發光束以提高兩個(或更多)光子同時到達同一位置(即熒光團分子)的概率。多光子顯微技術的例子包括二次諧波產生(SHG)、三次諧波產生(THG)、相干反斯托克斯拉曼光譜(CARS)和受激發射耗盡(STED)顯微技術。由于這些技術中的每一種都使用脈沖激光器,因此選擇能夠比較大限度地減少脈沖色散的光學組件很重要,并且激光反射二向色鏡應具有低GDD特性。利用多光子顯微鏡,進行組織內深層結構的無損成像。

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因斯蔻浦(上海)生物科技有限公司雙光子顯微鏡的基本原理是:在高光子密度的情況下,熒光分子可以同時吸收2個長波長的光子,在經過一個很短的所謂激發態壽命的時間后,發射出一個波長較短的光子;其效果和使用一個波長為長波長一半的光子去激發熒光分子是相同的。雙光子激發需要很高的光子密度,為了不損傷細胞,雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖激光器。這種激光器發出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,其脈沖寬度只有100飛秒,而其周期可以達到80至100兆赫茲。在使用高數值孔徑的物鏡將脈沖激光的光子聚焦時,物鏡的焦點處的光子密度是比較高的,雙光子激發只發生在物鏡的焦點上,所以雙光子顯微鏡不需要共聚焦***,提高了熒光檢測效率。顯微鏡產品正拉動市場需求,多光子顯微鏡市場發展潛力巨大。熒光多光子顯微鏡方案

多光子顯微鏡,提高醫學病理診斷的準確性和效率。美國bruker多光子顯微鏡成像深度

比較兩表格中的相關參數可以看出,基于分子光學標記的成像技術已經在生物活檢和基因表達規律方面展示了較大的優勢。例如,正電子發射斷層成像(PET)可實現對分子代謝的成像,空間分辨率∶1-2mm,時間分辨率;分鐘量級。與PET比較,光學成像的應用場合更廣(可測量更多的參數,請參見表1-1),且具有更高的時間分辨率(秒級),空間分辨率可達到微米。因此,二者相比,雖然光學成像在測量深度方面不及PET,但在測量參數種類與時空分辨率方面有一定優勢。對于小動物(如小白鼠)研究來說,光學成像技術可以實現小動物整體成像和在體基因表達成像。例如,初步研究表明,熒光介導層析成像可達到近10cm的測量深度;基于多光子激發的顯微成像技術可望實現小鼠體內基因表達的實時在體成像。美國bruker多光子顯微鏡成像深度