這里介紹熱力消毒**法。高熱破壞微生物蛋白質、核酸、細胞壁和細胞膜,從而導致微生物死亡。受高熱作用后,蛋白質分子運動加快,肽鏈連接鍵斷裂,蛋白變性凝固;細胞膜功能受損使胞內物質漏出,**內外環境平衡失調。不同種類微生物對熱的耐受力不同,多數無芽胞**經55-60℃作用30-60分鐘后死亡,100℃時迅速死亡。有芽胞**則對高溫有強的抵抗力,如肉毒芽胞梭菌煮沸需3—5小時才死亡。熱力**分干熱**法和濕熱**法兩大類,相同溫度下后者較前告效力大,其原因是:①濕熱環境中菌體蛋白易凝固;②濕熱穿透力比干熱大;③濕熱蒸氣變為液態時可釋放潛熱,迅速提高被**物體的溫度。1.干熱(dryheat)**法(1)焚燒。直接點燃或在焚燒爐內進行,*適用于廢棄物品或動物尸體。(2)燒灼。直接以火焰**,適用于微生物學實驗室接種環、針和試管口等**。(3)干烤。在干烤箱內進行,加熱至150-180℃2-4小時達到**效果,適用于高溫下不變質、不被破壞和不蒸發的物品,如玻璃器皿、瓷器,不能用于塑料、棉、紙制品。2.濕熱(moistheat)消毒**法(1)巴氏消毒法。巴氏消毒法(pasteurization)是用較低溫度殺滅液體中的病原微生物或特定微生物而保持物品中所需的不耐熱成分的方法。MEM培養基含有多種必需的營養成分。中國澳門基礎培養基報價
cs液體培養基和1/2cs液體培養基在用不同ph超純水(ph為)配制時的ph都較為穩定,在未調ph的情況下,可直接用于多種植物培養。如圖8所示。(2)以克新18號馬鈴薯無菌苗為例,觀察在未調ph和將ph調至:a、培養基制作方法:隨機選取超純水,測得其ph為,用于配制8種不同的液體培養基。第一種:1/2ms未調ph液體培養基,其為取1/2ms基本培養基置于ph為;第二種:1/2cs未調ph液體培養基,其為取1/2cs基本培養基置于ph為;第三種:ms未調ph液體培養基,其為取ms基本培養基置于ph為;第四種:cs未調ph液體培養基,其為取cs基本培養基置于ph為;第五種:1/,其為取1/2ms基本培養基置于ph為,調ph至;第六種:1/,其為取1/2cs基本培養基置于ph為,調ph至;第七種:,其為取ms基本培養基置于ph為,調ph至;第八種:,其為取cs基本培養基置于ph為,調ph至。b、培養方法:從培養實例4所述培養基獲得長勢**的馬鈴薯幼苗,在清水中緩苗2-3d后選取長勢一致的馬鈴薯幼苗,如圖9-a所示,置于上述8種不同液體培養基8d,每隔2d更新1次液體培養基;于溫度22-23℃、濕度50-70%、光照強度2000-3000lux、光照和黑暗交替(光照時間14h、黑暗時間10h)條件下培養。河南MEM a培養基答疑解惑減血清培養基減少了血清對細胞的影響。
無動物組分無血清細胞培養基的應用三、細胞培養基的質量標準和檢測方法澄清度水是細胞培養基的溶劑。細胞培養基中的營養成分只有完全溶解于水才能被細胞吸收攝取,細胞才能生長增殖,因此細胞培養基是否溶解以及培養液是否透明澄清直接影響培養基使用。該項目是通過對水溶解后的細胞培養基的澄清度檢查,判斷細胞培養基的澄清度。按中華******典2005年版二部附錄ⅨB進行。pH值哺乳類動物細胞生長需要合適的酸堿度,pH過高或者過低都會導致細胞死亡。pH值的測定也可以檢查細胞培養基的批間差。清大天一標準規定取規定量供試品,用注射用水(水溫20℃-30℃)溶解至1L,加入規定量碳酸氫鈉到上述溶液中,用與細胞培養基溶液pH值相近的兩點標準緩沖液校準后的酸度計進行測定。按中華******典2005年版二部附錄ⅥH進行;加入規定量的碳酸氫鈉(見表4-12)到上述溶液中,按中華******典2005年版二部附錄ⅥH進行。干燥減量的質量分數細胞培養基具有吸濕性,在空氣中放置水分會很快升**燥減量的質量分數表示產品中含濕量。細胞培養基是有菌制劑,其豐富的營養成分有利于微生物生長,控制細胞培養基中的水分可以防止微生物的繁殖,保持細胞培養基的養分。
4、本發明植物**培養基,其不含碘化鉀,在絕大多數植物中,碘元素不是必需元素,實驗發現去除碘化鉀對植物**培養沒有影響,并且植物在脫離培養基進行后期培養時仍可以從土壤等基質中富集碘元素,去掉碘化鉀成分,也簡化了培養基配制過程。5、本發明植物**培養基,其用nafeedta取代na2·edta和feso4·7h2o,該替換減少的**根離子通過適當增加**銨成分來補充,該替換主要基于兩個特征,一方面,nafeedta是可溶性螯合鐵,更容易被植物吸收,有利于植物葉綠體發育,另一方面,發明人發現,na2·edta和feso4·7h2o水溶液ph偏酸是ms、b5和n6等眾多植物**培養基原始ph偏低及ph波動大的主要原因,本發明培養基中使用nafeedta之后,經ph為,而植物**適宜生長的ph一般為,因此,使用nafeedta既促進了植物對鐵離子的吸收,又有利于培養基ph的穩定。6、本發明植物**培養基,其配方降低了mnso4·h2o、znso4·7h2o、h3bo3、cocl2·6h2o、na2moo4·2h2o的用量,增加了cuso4·5h2o、煙酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇的用量,該改變特征在于,有效減少愈傷**玻璃化發生,減少酚類物質產生,提高愈傷**的出愈率,實驗發現,優化后的培養基出愈時間提前,對多種植物的愈傷**誘導是有益的。無酚紅培養基在細胞實驗中減少了不必要的干擾。
另外,酚紅作為pH值的指示劑被加入到細胞培養基中。酚紅在產物純化過程中會造成干擾,并且具有一定的固醇類***樣作用,如雌***樣作用。當用于哺乳類動物細胞的培養,可能會發生一些固醇類反應。現在商業化細胞培養基中的酚紅含量可根據需求調整。因生物反應器具有pH在線檢測技術,生物反應器培養動物細胞時,酚紅可完全去除。細胞保護劑是保護細胞免受滲透壓變化、剪切力、氧化及氣泡作用等引起的損傷的物質。在使用生物反應器培養動物細胞時,細胞易被機械攪拌和通氣鼓泡產生的流體剪切力和氣泡作用所傷害甚至破損死亡。為降低這種損傷,除優化生物反應器結構和生產工藝外,可在細胞培養液中添加一些保護劑。其主要是通過改變細胞培養基物性或是對細胞具有保護作用的物質,常用的種類有血清、白蛋白、聚已二醇(PEG)、非離子性表面活性劑PluronicF68或是其他一些高分子聚合物等。3.細胞培養基的理化性質動物細胞在細胞培養基中不僅能存活,還要分裂增殖,合適的滲透壓、pH值等理化性質是細胞培養基必須具備的前提條件。動物細胞大多數需要輕微的堿性條件,適宜pH在~。細胞培養基的pH值通常需經校正的pH計來測定。在細胞生長過程中,隨細胞數量的增多和代謝活動的加強。F12培養基提供了豐富的營養,支持細胞增殖。貴州培養基代理商
RPMI1640培養基在免疫細胞培養中表現出色。中國澳門基礎培養基報價
三)、試驗結果:初代培養:使用本發明的消毒方法,消毒成功率能達到80%,誘導培養基萌芽率能達到90%,可以成功建立無菌再生體系。繼代培養:使用本發明的增殖培養基,繡球組培苗增殖倍率能夠達到8~10倍,組培苗高度一致,生長健壯。生根培養:使用本發明的生根培養基,繡球組培苗生根率能夠達到95%,根系發達,健壯,可以成功用于移栽大棚。本發明所指ms培養基是murashige和skoog研制的培養基,其成分配方表見表1。1/2ms培養基是指大量元素含量為ms培養基的一半,其他成分用量相同。表1、ms培養基成分表本發明涉及的植物生長調節劑有:6-ba—6-芐氨基嘌呤;ga3—赤霉素;iba—吲哚丁酸,naa—萘乙酸。本發明中的誘導培養基、增殖培養基和生根培養基均為液體培養基。本具體實施方式的實施例均為本發明的較佳實施例,并非依此限制本發明的保護范圍,故:凡依本發明的結構、形狀、原理所做的等效變化,均應涵蓋于本發明的保護范圍之內。中國澳門基礎培養基報價