0.25%胰酶是細胞生物學中常用的一種生物試劑,下面匯總一下胰酶使用過程中常見的一些問題。
胰酶的使用濃度是多少?胰酶濃度:常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。
胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時間延長,胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存,在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長期保存。胰酶使用的時候要注意什么?(1)在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。(2)胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差。 胰蛋白酶可以用于原代細胞的傳代過程中分散組織。中國臺灣EDTA胰酶市場報價
1、胰酶是,就是說PBS,注意,盡量不要用水來溶,因為要保持滲透壓。2、EDTA的工作液溶度是-,根據細胞消化的難易程度自己調整。EDTA并不是必須的,容易消化的細胞可不加。EDTA對細胞貼壁性有影響,因此使用時要甚重。如果影響貼壁,但消化時必須要用,那么在用完全培養基終止消化后,可離心棄上清,再加完全培養基培養,可去除EDTA。如果對貼壁沒影響,那么可不離心。3、EDTA的濃度也是質量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意,血清可終止胰酶的作用,但不能終止EDTA的作用,對有些細胞來說,終止消化后的離心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時候**易溶解,在配制時可先滴幾滴NaOH將pH調至8,注意,胰酶可使溶液變酸,所以要邊溶邊測pH,隨時調整。注意,不可加過量NaOH,否則過堿,細胞會受不了。6、胰酶EDTA相對比較難溶,可用磁力攪拌器,或放入4度冰箱過夜,待溶解后過濾**。7、可配2-3乘的胰酶,這樣比較節約時間和濾器,用的時候對上**PBS即可。8、儲存液放在-20度冰箱凍存,使用液放在4度,用的時候不要放在27度水浴鍋溫浴,因為這樣會讓胰酶很快失效,使用前放在室溫下一會。安徽國產胰酶哪家好胰酶的使用濃度是多少?
細胞傳代消化時所用胰酶的濃度越高是越好 貼壁細胞的消化: 常用的消化方法主要有酶消化法、離子螯合劑、物理法和冷凍法。其中**常用的是酶消化法。酶消化法:貼壁干細胞酶消化傳代時通常采用兩種方式:1、加入胰酶等干細胞脫落后,再加培養基中止胰酶作用,離心傳代;2、加入胰酶后,鏡下觀察待干細胞開始脫落時,棄去胰酶,加入培養液并分瓶。但前者太麻煩,而后者有可能對干細胞施加胰酶選擇,因為總是貼壁不牢的干細胞先脫落。
(含)英文名:(含)儲存條件:-20℃產品簡介:胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產生沒有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后,小腸內的腸肽酶會活化該酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點在于已經活化的胰蛋白酶,能夠繼續活化更多胰蛋白酶原,這種過程即自動催化。胰蛋白酶在小腸工作,它會將蛋白質水解為肽,進而分解為氨基酸,其**適溫度約為37℃。胰蛋白酶-碳酸氫銨溶液()由、除菌。本試劑可以直接用于培養細胞的消化,或者一些組織的消化,通常室溫下1min左右就可以消化大多數貼壁細胞。使用說明(*供參考):1.貼壁細胞的消化①吸除培養液,用無菌PBS、Hanks液或無血清培養液洗滌細胞一次,去除殘余的血清。②加入少量胰蛋白酶-碳酸氫銨溶液(),略蓋過細胞即可,室溫放置。(不同的細胞消化時間有所不同)③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變化;或者用***吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的完全細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。④如果發現消化不足,則加入胰蛋白酶-碳酸氫銨溶液()重新消化。⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落。 含EDTA的胰酶消化活力會比不含EDTA的強。
在組織細胞的體外培養和原代細胞培養中的組織細胞分散(將組織塊制備成單個細胞懸液)以及傳代細胞培養中,貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶(Trypsin),EDTA等。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側切段,水解細胞間的蛋白質,破壞細胞間的連接,從而使組織或貼壁細胞離散成單個細胞。胰酶分散細胞的活性與組織或細胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時間有關,在℃時,胰酶的作用能力**強,因此使用胰酶時,應把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為,而半貼壁細胞或對胰酶敏感的細胞常采用低濃度()的胰酶進行細胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+,從而破壞細胞連接促進細胞的解離,因此在胰酶溶液中常常會加入一定量的EDTA混合使用,以增強解離效果。但是對于EDTA可能會干擾后續的測試分析時,推薦選擇不含EDTA的消化液。本產品含有(Trypsin),溶于無鈣鎂平衡鹽溶液中,經過濾除菌,可以直接用于培養細胞和組織的消化。為改良型,除了具有方便快速、穩定安全、細胞狀態好等特點之外,消化時間更短,消化效果媲美進口產品,特別適用于難消化的細胞。 胰酶細胞消化液(不含EDTA)消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差。中國臺灣EDTA胰酶市場報價
胰蛋白酶溶液用于組織和單層細胞的解離。中國臺灣EDTA胰酶市場報價
(不含EDTA含酚紅)性質、用途與生產工藝背景胰酶又名胰醇素、胰液素。白色或淡黃色無定形粉末。系從各種動物胰臟制取的混合物,主要是蛋白酶、脂酶、淀粉酶。溶于水呈微渾溶液。不溶于醇、醚。有引濕性,遇酸、堿及熱即喪失活力,水溶液遇酸、熱、重金屬或單寧酸時產生沉淀。為助消化藥,用于缺乏胰液的***癥。也用于皮革工業和紡織印染,主要用于酶法脫毛。將絞碎的豬胰漿經***、提取、沉淀、脫脂、干燥、粉碎而得。簡介(不含EDTA含酚紅)為細胞培養基,1.不含EDTA含酚紅:含酚紅,(1:250)溶于HBSS溶液,不含鈣鎂。-20℃保存。胰(不含EDTA含酚紅)含,不含EDTA和酚紅,溶于無鈣鎂平衡鹽溶液中,經過濾除菌,可以直接用于培養細胞和組織的消化,通常室溫消化2分鐘左右就消化下大多數貼壁細胞。使用方法(不含EDTA含酚紅)使用說明---貼壁細胞Chemicalbook的消化:a)吸去培養液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。b)加入少量胰蛋白酶消化液,蓋過細胞即可,室溫放置1-2分鐘。不同的細胞消化時間有所不同,對于貼壁牢固的細胞可適當延長消化時間。c)顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變化。 中國臺灣EDTA胰酶市場報價