K+主要分布在細胞內液,細胞內K+對于***某些酶是必需的,并在調節細胞內環境的酸堿平衡上也有極重要意義。Ca2+在細胞外液中的作用是將**內部細胞之間相互粘著,在細胞內參與許多重要的細胞生理活動,如傳導、參與肌肉細胞收縮等。在懸浮培養時,為了減少細胞的聚集和附著,要減少Ca2+的濃度。Mg2+是構成細胞間質的重要成分,對于細胞間相互穩定結合有很重要的意義。磷的化合物對細胞物質代謝和生理功能調控有重要作用。其他成分:肽、核苷、嘌呤等??蓭椭毎目寺』囵B及維持某些特殊細胞系的生長。分類低血清細胞培養基概述營養豐富的培養基是維持細胞活性及高密度生長的基礎,營養缺乏容易引起細胞凋亡,新生牛血清中所含大部分營養成分可以通過化學成分明確的營養物質如氨基酸維生素等成分組合取代。低血清培養基營養成分大優于基礎培養基,*需添加1%~5%新生牛血清,而對細胞生長、增殖、形態、活性和功能沒有影響甚至有所改善。在國外低血清培養基早已有之,如Gibco等。但是他們的低血清培養基是在基礎培養基中選擇性的加入重組胰島素(recombinantinsulin)、人源轉鐵蛋白(human(holo)tran-sferrin)以及牛血清白蛋白等,有些還包含一些生長因子。無酚紅培養基在敏感細胞系的培養中表現優越。江西培養基供應商
cs液體培養基和1/2cs液體培養基在用不同ph超純水(ph為)配制時的ph都較為穩定,在未調ph的情況下,可直接用于多種植物培養。如圖8所示。(2)以克新18號馬鈴薯無菌苗為例,觀察在未調ph和將ph調至:a、培養基制作方法:隨機選取超純水,測得其ph為,用于配制8種不同的液體培養基。第一種:1/2ms未調ph液體培養基,其為取1/2ms基本培養基置于ph為;第二種:1/2cs未調ph液體培養基,其為取1/2cs基本培養基置于ph為;第三種:ms未調ph液體培養基,其為取ms基本培養基置于ph為;第四種:cs未調ph液體培養基,其為取cs基本培養基置于ph為;第五種:1/,其為取1/2ms基本培養基置于ph為,調ph至;第六種:1/,其為取1/2cs基本培養基置于ph為,調ph至;第七種:,其為取ms基本培養基置于ph為,調ph至;第八種:,其為取cs基本培養基置于ph為,調ph至。b、培養方法:從培養實例4所述培養基獲得長勢**的馬鈴薯幼苗,在清水中緩苗2-3d后選取長勢一致的馬鈴薯幼苗,如圖9-a所示,置于上述8種不同液體培養基8d,每隔2d更新1次液體培養基;于溫度22-23℃、濕度50-70%、光照強度2000-3000lux、光照和黑暗交替(光照時間14h、黑暗時間10h)條件下培養。甘肅減血清培養基答疑解惑減血清培養基提高了實驗的可重復性。
培養實例2和對比培養例2的培養結果比較:蘭茲貝格型擬南芥種子在1/2cs生長培養基和1/2ms生長培養基上的萌發率均為100%;在相同條件下培養28d時,與1/2ms生長培養基相比,1/2cs生長培養基中的幼苗長勢更佳,在平均株高、蓮座葉大小、根長、花朵數量等方面均優于1/2ms生長培養基;并且,采用上述培養方法,不論是1/2cs生長培養基還是1/2ms生長培養基,均能獲得形態完整的花粉,且花粉活力高達%,其特點在于選擇了蘭茲貝格型擬南芥作為培養對象,且選擇了高度適中的培養盒進行培養,克服了傳統培養方法無法獲得擬南芥整個生育期無菌苗的缺點,所獲無菌花***可直接用于花*離體培養等研究內容。如圖2所示。培養實例3:油菜無菌苗培養與培養實例1不同的地方在于:步驟(1)所用種子為中雙11號油菜種子,其余完全同培養實例1。1/2cs生長培養基的培養結果為:中雙11號油菜種子在1/2cs生長培養基上的萌發率為100%,培養9d的幼苗,表現為植株健壯、平均株高為,葉色濃綠,莖稈粗壯、平均莖中粗為,根系發達、平均根數為(>)、平均主根長為。如圖3所示。對比培養例3:將1/2cs基本培養基替換為1/2ms基本培養基,其余完全同培養實例3,1/2ms基本培養基的成分及用量如表1所示。
愈傷**誘導率為100%。如圖6所示。對比培養例6:將cs基本培養基替換為ms基本培養基,其余完全同培養實例6,ms基本培養基的成分及用量如表1所示。ms誘導培養基的誘導結果為:本氏***葉片愈傷**誘導時,培養15-18d的葉片略微增厚,在葉片四周產生較少的淡綠色愈傷**,愈傷**誘導率為90%,在愈傷**團塊上產生的嫩綠色不定芽數量較少;本氏***根愈傷**誘導時,培養9-11d在切口處產生大量淡黃色致密的愈傷**,愈傷**誘導率為100%。如圖6所示。培養實例6和對比培養例6的誘導結果比較:用上述方法進行本氏***葉片愈傷**誘導時,cs誘導培養基愈傷**誘導率為100%,而ms誘導培養基的誘導率*為90%,在所述相同培養條件下,與ms誘導培養基相比,cs誘導培養基可更快誘導出大量致密的葉片愈傷**、產生更多的不定芽;用上述方法進行本氏***根愈傷**誘導時,cs誘導培養基與ms誘導培養基誘導出的根愈傷**形態相近,兩種培養基的根愈傷**誘導率均為100%。如圖6所示。培養實例7:水稻成熟胚愈傷**誘導(1)水稻種子消毒及篩選:a、選種:以秈稻縉恢10號為例,將水稻種子晾曬干燥后于4℃下長期保存,挑選籽粒飽滿、大小基本一致的水稻種子,用剪刀從種子中部剪開,去除谷殼。無酚紅培養基確保了實驗結果的準確性。
文獻2“混合硝酸稀土對谷氨酸產生菌的影響,氨基酸雜志”發現,在發酵培養基中添加一定量的稀土元素,能夠提高谷氨酸的產量。申請人之前的**技術“一種谷氨酸發酵培養基制備方法”,在常規培養基的基礎上進行了改進,通過添加菌體蛋白浸膏來替代酵母膏氮源,不但節約了成本,還能提高氨基酸發酵產率,一舉兩得。技術實現要素:在已有發酵培養基的基礎上,申請人針對微生物發酵的特點,繼續進行了改進,以提高發酵效率,據此,提出了一種優化的谷氨酸發酵培養基。本發明是通過如下技術方案來實現的:一種優化的谷氨酸發酵培養基,其包括發酵培養基a和發酵培養基b;所述發酵培養基a首先添加,然后間隔12h以上添加發酵培養基b。進一步地,所述發酵培養基a的制備方法為:取各原料:葡萄糖,酵母浸膏,k2hpo4,mgso4·7h2o,2-羥基乙胺,cecl3,mnso4·h2o,feso4·7h2o,vb1,生物素;將各原料攪拌均勻后,調節ph,**,制得發酵培養基a。進一步地,所述發酵培養基b的制備方法為:取各原料:琥珀酸,尿素,殼聚糖;將各原料攪拌均勻后,調節ph,**,制得發酵培養基b。推薦地,所述發酵培養基a的制備方法為:取各原料:葡萄糖50-100g/l,酵母浸膏10-30g/l,k2hpo41-5g/l。無酚紅培養基避免了酚紅對細胞的潛在毒性作用。廣西DMEM高糖培養基答疑解惑
無酚紅培養基在細胞實驗中減少了潛在的毒性作用。江西培養基供應商
所描述的實施例**是本申請一部分實施例,而不是全部的實施例?;诒旧暾堉械膶嵤├绢I域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例,都應當屬于本發明保護的范圍。實施例1一種優化的谷氨酸發酵培養基,其包括發酵培養基a和發酵培養基b;所述發酵培養基a首先添加,然后間隔24h添加發酵培養基b。所述發酵培養基a的制備方法為:取各原料:葡萄糖80g/l,酵母浸膏20g/l,k2hpo42g/l,mgso4·7h2o50mg/l,2-羥基乙胺40mg/l,cecl310mg/l,mnso4·h2o3mg/l,feso4·7h2o3mg/l,vb110mg/l,生物素7μg/l;將各原料攪拌均勻后,調節ph為,121℃**15min,自然冷卻,制得發酵培養基a;所述發酵培養基b的制備方法為:取各原料:琥珀酸5g/l,尿素2g/l,殼聚糖80mg/l;將各原料攪拌均勻后,調節ph為,121℃**15min,自然冷卻,制得發酵培養基b;采用常規發酵工藝:將黃色短桿菌gdk-9按8%接種量將種子液(od600nm為)接入裝有60l發酵培養基a的100l發酵罐中進行發酵培養,發酵培養24h,然后添加10l發酵培養基b,繼續發酵培養24h,收集發酵液;整個發酵培養過程中,控制發酵溫度35℃,通風比1∶,攪拌轉速300r/min,溶氧維持在20%。江西培養基供應商