**早開發的基礎培養基(minimalessentialmedium,MEM),其本質為含有鹽、氨基酸、維生素和其他必需營養物的pH緩沖的等滲混合物。在此基礎上,DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各種合成細胞培養基被不斷開發出來。常用合成培養基的配方此處不詳細介紹,其特性及應用的范圍見表1-2。表1-2常用合成培養基的特性及應用的范圍培養基名稱特性及應用范圍199細胞培養基添加適量的血清后,可***用于多種細胞培養,并用于**學、*苗生產等。MEM細胞培養基MEM(MinimalEssentialMedium)培養基有含Earle's平衡鹽的類型,也有含Hanks'平衡鹽的類型;有高壓**型的,也有過濾**型的;還有含非必需氨基酸的類型。是**基本、適用范圍**廣的細胞培養基。DMEM細胞培養基DMEM(Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium)是由Dulbecco在MEM培養基的基礎上改良獲得的,各成分份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)兩種類型。細胞生長快。附著稍差的腫*細胞、克隆培養用高糖效果較好,常用于雜交*的骨髓*細胞和DNA轉染的轉化細胞培養。IMDM細胞培養基IMDM(Iscove’smodifiedDMEM)是由Iscove在DMEM基礎上改良,增加了幾種氨基酸和胱氨酸量等。可用于雜交*細胞培養。減血清培養基提高了實驗結果的可靠性。新疆DMEM高糖培養基常見問題
培養實例7和對比培養例7的誘導結果比較::用上述方法進行水稻成熟胚愈傷**誘導時,cs誘導培養基與ms誘導培養基誘導出的愈傷**形態大小均相近,出愈率均為100%。如圖7所示。培養實例8:液體培養基在植物水培中的應用(1)用不同ph的超純水配制的液體培養基ph值穩定性比較:a、用不同ph的超純水配制液體培養基:通常多種因素會導致相同超純水制水機產出的超純水ph變動較大,ph通常為。分別選取ph為、、、、、,分別配制ms液體培養基、cs液體培養基、1/2ms液體培養基、1/2cs液體培養基,制作方法為:ms液體培養基為取ms基本培養基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l;cs液體培養基為取cs基本培養基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l;1/2ms液體培養基為取1/2ms基本培養基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l;1/2cs液體培養基為取1/2cs基本培養基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l。b、結果為:用ph為,ms液體培養基ph為,cs液體培養基ph為,1/2ms液體培養基ph為,1/2cs液體培養基ph為。植物**適宜生長的ph一般為,觀察可知,ms液體培養基及1/2ms液體培養基的ph偏酸性且波動較大,其應用于液體培養基時通常需要調節ph,過程繁瑣,相比之下。新疆DMEM高糖培養基常見問題無血清培養基適合于無血清環境的細胞培養。
無芽孢:E=209—250*103J/mol。顯然,(5)式的比值〉1,說明提高溫度對于第二個平行反應,即菌體死亡的反應是有利的。提高溫度,雖然兩個平行性反應的反應速度常數都提高了,但是,達到同樣的**效果,所需要的時間卻縮短了,由于***個反應也就是營養成分破壞的反應速度常速增加的少,因此,有利于減少培養基在**過程中營養成分的破壞。換言之,高溫短時**對于培養基營養成分是有利的。通常所說的高溫短時**可以提高生產效益,其理論根據就在于此。結論1:當**溫度上升時,微生物殺死速率的提高要超過培養基成分的破壞速率的增加。要減少營養成分的破壞,可升高溫度**。結論2:在**時選擇較高的溫度、較短的時間,這樣便既可達到需要的**程度,同時又可減少營養物質的損失。(二)、影響**效果的因素(1)微生物種類:不同的微生物k值不同。(2)初始菌量:在保持N值不變的前提下,t與初始菌量N0的對數成正比。(3)培養基成份:油脂、蛋白質增加微生物的耐熱性。(4)傳熱與混合狀況:影響受熱均勻度。(5)培養基中固體顆粒的存在影響熱穿透。(6)蒸汽中空氣的存在降低蒸汽分壓和**溫度。(7)pH:酸性pH下可加快微生物熱死速率三、培養基的工業**。
此法由巴斯德創立,用于酒類消毒而得名。目前用于牛乳消毒。方法有兩種:一種為℃加熱15秒,另一種為63-66℃加熱30分鐘。大多采用第一種方法。(2)煮沸法。在1個大氣壓下,水煮沸后溫度達100℃,煮沸5分鐘后可殺死一般**繁殖體。如于水中加入2%碳酸鈉,可將其沸點提高至105℃,既可促進芽胞的殺滅,又可防止金屬器皿生銹。(3)流通蒸氣消毒法。又稱常壓蒸氣消毒法,常用附諾(Amold)流通蒸氣**器,利用1個大氣壓下100℃水蒸氣進行消毒,10-30分鐘后**繁殖體被殺死,但對芽孢作用不大。(4)間歇**法(fractionalsterilization)。采用間歇方式達到**目的。將**物品置于阿諾流通蒸氣**器內,100℃加熱15-30分鐘,每日1次,連續3次。每次**后取出物品置37℃孵育箱過夜,致殘存的芽胞發育成繁殖體,次日再通過流通蒸氣**器加熱而被殺滅。如此反復,既可殺滅芽胞,又可使不耐高溫的物質免受影響。若某些物質不耐100攝氏度,則可將溫度下降至75-80℃,每次加熱時間延長到30-60分鐘,常用血清凝固器對呂氏血清培養基和L-J培養基的**屬此方法。(5)高壓蒸氣火菌法。利用密閉的耐高壓蒸氣**器(autoclave),在蒸氣不外溢的條件下,使鍋內壓力增高,隨之蒸氣溫度也增高。通常在℃。減血清培養基提高了實驗的可重復性。
從而使培養基的預熱、加熱**及冷卻過程可在同一設備內完成。該流程的加熱和冷卻時間比噴射加熱連續**流程要長些,但由于在培養基的預熱過程同時也起到了**后培養基的冷卻,因而節約了蒸汽和冷卻水的用量。(2)蒸汽直接噴射型的連續**系統流程中采用了蒸汽噴射器,它使培養液與高溫蒸汽直接接觸,從而在短時間內可將培養液急速升溫至預定的**溫度然后在該溫度下維持一段時間**,**后的培養基通過一膨脹閥進入真空冷卻器急速冷卻,從圖中可以看出,由于該流程中培養基受熱時間短,營養物質的損失也就不很嚴重,同時該流程保證了培養基物料**先出,避免了過熱或**不徹底等現象。(3)由連消塔、維持罐和噴淋冷卻組成的**系統連續**的基本設備一般包括:①配料預熱罐,將配制好的料液預熱到60-70℃,以避免連續**時由于料液與蒸汽溫度過大而產生水汽撞擊聲;②連消塔,連消塔的作用主要是使高溫蒸汽與料液迅速接觸混和,并使料液的溫度很快升高到**溫度(126-132)℃;③維持罐,連消塔加熱的時間很短,光靠這段時間的**是不夠的,維持罐的作用是使料液在**溫度下保持5-7min,以達到**的目的;④冷卻管,從維持罐出來的料液要經過冷卻排管進行冷卻。無酚紅培養基確保了實驗結果的準確性。廣西Ham's F12培養基進口
無血清培養基提供了純凈的細胞培養環境。新疆DMEM高糖培養基常見問題
又能使培養基的破壞降低至比較低的工藝條件。許多實驗研究結果表明,培養基在高溫**的過程中,其營養成分的破壞在很大程度上可以用一級反應來描述其反應速度:式中—表示營養成分破環的速率,C:表示營養成分的濃度K':為反應速度常數,1/s,應速度常數K'與溫度的關系,可以使用阿累尼烏斯公式表示之:K'=A'exp-△E'/RT……(1)式中——:反應速度常數,1/S:反應的活化能(J/mol)R:氣體常數,*J/mol*kT:反應的***溫度,k同樣,**過程中的反應速度常數也可以用下式表示出:K=A×exp[-E/RT]……(2)(1)、(2)式可以改寫成下列形式:lg(k,2/k,1)=E,/R×(1/T1–T2)……(3)lg(k2/k1)=E/R×(1/T1–T2)……(4)(3)(4)的意義是指:反應的溫度從T1升高到T2,其反應的速度常數分別從k,1增加到k,2;k1增加到k2;培養基的**過程實際上是營養成分破壞、菌體死亡的兩個平行性反應,對于平行性反應,反應溫度的提高,其兩個平行性反應的速度常數都增加,但增加的幅度(大小)卻不同,其比值可以表示為:lg(k2/k1)/lg(k,2/k,1)=E/E,……(5)實驗證明:營養成分為破壞的反應的活化能E的值為E,=—*103J/mol;而菌體死亡的活化能E芽孢:E=418*103J/mol。新疆DMEM高糖培養基常見問題