Genovis提供具有低水平內Du素的FabRICATOR（IdeS）凍干酶，用于IgG的鉸鏈以下消化。FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體，產生均質的F（ab'）2和Fc片段。FabRICATORLowEndotoxin以凍干粉的形式提供兩種不同規格：2000和5000單位，分別用于消化2mg或5mgIgG。該產品配方每瓶的內Du素含量較低，2000單位小瓶的內Du素含量為<0.04EU/瓶，5000單位小瓶的內Du素含量為<0.10EU/瓶。有效消化，內DU素水平低；適用于靈敏的體內或基于細胞的檢測。Genovis的FabDELLO可在鉸鏈上方的單個位點消化人 IgG1，在兩小時內產生完整的 Fab 和 Fc 片段。青海GlycINATORIdeS蛋白酶

樣品制備的條件可能會在樣品中誘發偽影，因此需要避免高溫和堿性pH值進行質譜分析。如果可能的話，避免多個步驟并在一鍋反應中進行消化和還原也可能是有益的。與IdeS不同，為了探索Genovis的GingisREX對離液劑和去液劑的穩定性和耐受性，在一系列試劑中測試了酶活性，并使用底物測定進行了評估。數據顯示，GingisREX在6M時耐受尿素，吐溫高達1%，但活性在0.1%時受到SDC的負面影響。該酶在 pH 值范圍為 5.0 至 9.0 時顯示出活性，在 pH 值為 6.5-8.0 之間。綜上所述，GingisREX可用于一鍋反應，以同時消化和變性6M尿素。與Genovis的IdeS不同，雙特異性 T 細胞接合器 （BiTE） 分子是一種融合蛋白療法，其中兩個 scFv 融合，形成一個雙特異性分子，其中一個 scFv 靶向細胞毒性 T 細胞，另一個靶向Ai癥抗原。該蛋白質由四個蛋白質結構域組成，兩個 scFv 均由 VL 和 VH 區域組成，總共由三個柔性 GS 連接子連接。這種蛋白質的大尺寸（54 kDa）可能對通過完整質譜法進行產品質量監測構成挑戰，因為標準MS儀器可能無法提供蛋白質的單同位素分辨率。北京FabALACTICAIdeS蛋白酶為了降低度拉糖肽復雜性，使用GlycINATOR Lyophilized去除Fc聚糖，并用DTT還原鏈間二硫鍵。

為什么客戶想在他們的工作試用Genovis的FabRICATOR（IdeS）。FabRICATOR的高特異性(在鉸鏈下方有單個消化位點)以及它對IgG種和亞類表現出活性的事實使其成為高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大優勢是速度。在大多數IgG上，您可以在短短30分鐘內生成F(ab’)2和Fc/2片段，這一速度簡化了方法開發，并允許快速有效的中層表征，使客戶能夠在不比做完整質量實驗長太多的時間內獲得更多關于分子的信息。Genovis發現更多的緩沖液與溶液中的FabRICATOR消解相容（更多信息）。Genovis已經測試了PBS和150mM醋酸銨，pH7，結果良好。并且應該也適用于FabRICATORHPLC。然而，緩沖液的離子強度會影響抗體片段在FabRICATORHPLC（IdeS）色譜柱上的保留，并且IgG1亞基需要至少100-150mM鹽才能洗脫為單個窄峰。其他IgG亞類或融合蛋白可能需要對緩沖液組成進行一些優化。

Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一種獨特的酶，可在鉸鏈區域下方的特定位點消化IgG，產生均勻的F（ab'）2和Fc/2片段。除IgG外，沒有其他底物是已知的。IgG在30分鐘內消化，如果孵育時間延長，則不存在過度消化的風險。由于FabRICATOR在生理反應條件下消化IgG，因此保留了免疫反應性。在37°C下獲得良好的活性，但也可以在室溫下使用較長的反應時間進行消解。FabRICATOR可消化人類的所有亞類以及猴子、兔子和綿羊IgG的某些亞類。它對小鼠IgG2a和IgG3的活性有限-為了消化這些抗體物種，我們建議使用FabRICATORZ。FabRICATOR是從化膿性鏈球菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽，分子量為37725Da。FabRICATOR是IdeS的重組修飾形式，由GenovisAB開發，用于需要高標準和一致性的生物技術應用。有一種檢測FabRICATOR酶的方法。了解有關山羊多克隆抗體Anti-FabRICATOR的更多信息。消化在1小時內完成，且具有特異性。即使孵育時間延長，也沒有過度消化的風險。

用于IgA1和IgA2m1以上鉸鏈消化的凍干酶。與IdeS不同，Genovis提供的IgASAPSub1+2在鉸鏈上方的一個特定位點消化人IgA1和IgA2m1，產生完整且均勻的Fab和Fc片段。由于人IgA1的鉸鏈比IgA2的鉸鏈長，因此IgA1和IgA2m1之間來自消化位點的氨基酸C末端不同。IgASAPSub1+2可消化分泌物和血清IgA。孵育時間為過夜（16-18小時），并且由于酶的特異性，沒有過度消化的風險。該酶在pH值為6.0至8.0時具有活性，不需要還原條件或輔助因子即可產生活性。活性為37°C。IgASAPSub1+2是從丹毒梭菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽，分子量為131kDa。IgASAPSub1+2凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在1000個單位的小瓶中，用于消化1mgIgA1和IgA2m1。在鉸鏈正上方的一個特定位點消化人 IgG1，產生完整的 Fab 和 Fc 片段。IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學

可在鉸鏈上方的一個特定位點消化人 IgA1，產生完整且均質的 Fab 和 Fc 片段。青海GlycINATORIdeS蛋白酶

對于攜帶突變鉸鏈的 Fc 融合蛋白或抗體來說，Fab 和 Fc 片段的生成可能具有挑戰性。Genovis的GingisKHAN酶在鉸鏈上方一個可觸及的賴氨酸位點消化人IgG1，在足夠溫和的還原條件下保留鏈內和鏈間二硫鍵，從而產生完整的Fab和Fc片段。對于融合蛋白，消化通常在鉸鏈上方獲得，但融合伴侶的結構和氨基酸序列可能導致其他暴露的消化位點。如果去除保守的 Fc N-聚糖，Fc 中的第二個切割位點也可能被GingisKHAN酶切。將精選的單克隆人 IgG1 抗體和 Fc 融合蛋白與 GingisKHAN 在 37°C 下孵育 1 小時，并通過 HPLC 進行分析。青海GlycINATORIdeS蛋白酶