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遼寧GlycINATORIdeS蛋白酶抗體酶切

來源: 發布時間:2024-05-14

Genovis的FabRICATOR(IdeS)酶 可用于 IgG 的所有人類亞類以及人源化和嵌合 IgG。該酶對其他物種的 IgG 也有活性,包括來自大鼠、猴子、兔子和綿羊的某些類別的 IgG。因此,FabRICATOR的高特異性在某些情況下會使其對鉸鏈區域的突變敏感,并損害酶活性。來自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成,與 FabRICATOR 相比,FabRICATOR Z 在消化這些 IgG 方面具有更高的效率。然而,小鼠 IgG1 在鉸鏈下方具有不同的序列,并且不被 FabRICATOR Z 消化。對于這種抗體種類,FabULOUS 和 FabULOUS Fab 試劑盒可用于制備 Fab 片段。發現GingisREX精氨酸殘基的特異性,Arg-C在賴氨酸和其他殘基的非特異性。遼寧GlycINATORIdeS蛋白酶抗體酶切

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與IdeS不同,Genovis的GlySERIAS是一種獨特的酶,可消化柔性富含甘氨酸的融合蛋白連接子,例如Gly4Ser和GlyxSery(GS)以及聚甘氨酸(G)接頭。該酶能夠分離多功能融合蛋白的各個結構域,以促進表征并增加對這些分子的理解。融合蛋白的中級分析既可以降低整體樣品的復雜性,又可以對翻譯后修飾進行結構域特異性鑒定和監測。為了改善連接子的去除,Genovis建議使用GlySERIASImmobilized。對于連接子表征,我們推薦GlySERIAS凍干。具有柔性接頭的獨特酶消化融合蛋白;中級方法可降低融合蛋白表征的復雜性;復雜融合蛋白的可靠且可重復的消化。Genovis的GlySERIAS酶切由甘氨酸或甘氨酸和絲氨酸殘基的重復序列組成的柔性連接子。該酶在天然反應條件下具有活性,能夠對復雜的融合蛋白進行中級表征。連接子區域同時在多個位點被消化,導致先前連接的組分分離。活性發生在pH7.6下,孵育時間可以根據所需的產物而變化。GlySERIAS是從噬菌體K克隆而來的,在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽,分子量為18kDa。天津FabALACTICAIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶使用GlySERIAS固定化消化融合蛋白得到均質Fc/2。

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與IdeS不同,為了獲得更均勻的度拉糖肽融合蛋白的消化產物,用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白質消化該蛋白質,該蛋白由與瓊脂糖珠共價偶聯的GlySERIAS酶組成。通過將酶偶聯到樹脂上,可以增加酶與蛋白質的比率,從而可以進一步加速反應,以獲得更完整的連接子消化。此外,該酶不會存在于樣品制備中,可能會干擾樣品分析。為了進行比較,度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化過夜,或用GlySERIAS凍干1小時并在37°C下過夜消化。 為了降低樣品復雜性,使用內切糖苷酶GlycINATOR凍干去除Fc聚糖,并減少鏈間二硫鍵。通過反相LC-MS對樣品的分析表明,GlySERIAS Immobilized幾乎完全消化了Fc結構域中的連接子,留下了接近均質的Fc/2產物,其中含有來自連接子的一個絲氨酸殘基。用 GlySERIAS 凍干 1 小時或過夜消化,兩者都會產生幾種 Fc 產物,并附著不同數量的絲氨酸和甘氨酸殘基。GLP-1肽在所有三個樣品中以兩種變體存在。使用GlySERIAS固定化消化的均質Fc/2能夠詳細研究特定于Fc區域的質量屬性。此外,在樣品中未觀察到干擾分析的酶峰。作為補充,Fc/2 產物在用 GlySERIAS 凍干消化后殘留部分連接子,有助于研究位于 GS 連接子的修飾。

與IdeS不同。Genovis的IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶,可在鉸鏈上方的一個特定位點消化人IgA1,產生完整且均質的Fab和Fc片段。IgASAPSub1可水解分泌物和血清IgA1。消化在1小時內完成,并且由于酶的特異性,如果孵育時間延長,則不存在過度消化的風險。該酶在pH值6.5至8.0下具有活性,不需要還原條件或輔助因子即可發揮活性。活性是在37°C下,但也可以在室溫下使用增加孵育時間進行消化。IgASAPSub1是從口腔鏈球菌克隆而來的,并在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽,分子量為148kDa。IgASAPSub1凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在1000個單位的小瓶中,用于消化1mgIgA1。Genovis 酶產品,被世界各地的科學家使用,創新的產品形式促進了生物藥物的開發和質量控制。

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Genovis提供凍干和固定化的FabRICATOR(IdeS),為客戶提供了許多選擇,以滿足他們的需求。 凍干形式用于高度靈活的方法開發的目的,并隨時準備使用,只需重組和添加到IgG樣本。 凍干酶的靈活性也意味著它可以應用于更高的通量和自動化的工作流程。 Genovis還提供了在瓊脂糖樹脂上固定化的酶,在隨時可用的旋轉柱中,這可以極大限度地減少在樣品中殘留的酶,這可能是有利的。 對于更多的制備應用,我們提供FabRICATOR Fab2試劑盒,這是IgG片段生成和純化的強大工具。 這包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc純化柱,用于亞基的親和純化。 由于FabRICATOR在非還原條件下是活性的,F(ab’)2片段保留其鏈間和鏈內二硫鍵,如果片段想用于結合研究,這一點尤為重要,因為結合效率和免疫反應性將被保留。FabRICATOR(IdeS)不需要還原條件來獲得比較好的活性。湖南GingisKHANIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

Genovis將固定化酶固定在磁珠上,用于在鉸鏈下方自動消化 IgG。遼寧GlycINATORIdeS蛋白酶抗體酶切

Genovis酶的適應性和更高的通量和自動化工作流程的中級方法,這是非常重要的。 隨著分析方法和儀器的改進,在表征實驗室中有更大的能力進行更多類型的分析,或者在工藝開發或QC實驗室中有更先進的分析儀器。 當涉及到能夠支持大量樣本分析的活動時,例如克隆篩選,工藝開發和驗證以及穩定性研究,這是非常好的。 此外,Genovis產品的效率、健壯性(Robust)和易用性使它們更容易應用于這些類型的工作,而且,也適用于受控環境中的批次放行方法。Genovis的產品很好地支持這種類型的工作,這也促使Genovis不斷推出新產品和現有產品的不同形式,以支持客戶的工作。遼寧GlycINATORIdeS蛋白酶抗體酶切