微滴式數字PCR系統在傳統的PCR擴增前對樣品進行微滴化處理,即將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個納升級的微滴,其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子,或者含有一個至數個待檢核酸靶分子。經PCR擴增后,逐個對每個微滴進行檢測,有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,根據泊松分布原理及陽性微滴的個數與比例即可得出靶分子的起始拷貝數或濃度。 與傳統PCR相比所具有的優勢 不依賴Ct值或內參基因,即可確定低至單拷貝的待檢靶分子的***數目。微滴技術讓數字PCR更低成本,且更實用。 高靈敏度——數字PCR的...
數字PCR是一種核酸分子***定量技術。當前核酸分子的定量有三種方法,光度法基于核酸分子的吸光度來定量;,Ct值就是指可以檢測到熒光值對應的循環數;數字PCR是***的定量技術,基于單分子PCR方法來進行計數的核酸定量,是一種***定量的方法。主要采用當前分析化學熱門研究領域的微流控或微滴化方法,將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或微滴中,每個反應器的核酸模板數少于或者等于1個。這樣經過PCR循環之后,有一個核酸分子模板的反應器就會給出熒光信號,沒有模板的反應器就沒有熒光信號。根據相對比例和反應器的體積,就可以推算出原始溶液的核酸濃度。能檢測低至0.01%的突變基因。上海...
MiniDrop數字PCR儀由Creator微滴生成儀、Detector微滴檢測儀、MD Microchip微流控芯片及MD Plotter數據分析軟件組成,該系統的**為微流控微滴生成技術,采用原創性的油液,在40um微管道中利用氣壓驅動在2分鐘內生成50萬微滴,單次運行生成400萬微滴,微滴體積達皮升級,檢測線性范圍達到5個數量級,各項指標均超越國內外的主流產品。 MiniDrop創新性采用高壓驅動的方法將樣本分割成50萬份,打破了國外廠商在微滴式數字PCR領域的壟斷。 準確度不完全依賴于擴增效率。無錫廣州永諾數字PCR如何選型 研究方向 無創...
研究方向基因表達差異研究 檢測時完全不依賴傳統的Ct值即可實現真正意義上的***定量,從而提供了比實時熒光定量PCR更精確的基因差異表達研究,尤其對于那些靶基因表達差異微小的情況:microRNA、lncRNAs等的表達分析、等位基因的不平衡表達、單細胞基因表達分析、Exosome內核酸分子定量分析等。 拷貝數變異(CNV)研究 微滴化的樣品處理及檢測,這種擺脫Ct值的計算方法而直接獲取目標基因的***拷貝數,為拷貝數變異的研究提供了***的檢測精度。是其他諸如二代測序、芯片雜交等平臺無法達到的,因此采用數字PCR能夠有效對NGS、aCGH的實驗結果進行驗...
MicroDrop-100微滴式數字PCR 應用范圍如下: a. 動植物檢驗檢疫,動物源性分析、極微量病原菌檢測定量分析、轉基因產品檢測; b. 降低篩查成本、縮短檢測周期,適用于T13\T18\T21三體綜合征等遺傳病的風險評估;適用于zhong瘤早期篩查、分子分型、靶向用藥和療效監測等;適用于傳染性疾病的早期診斷和診療指導; c. 可用于DNA甲基化的檢測、CRISPR-Cas9基因編輯效率檢測等。 d.基因表達差異監測單細胞研究:測序、PCR e.無創產前篩查:低成本、快速、傳染性疾病:HBV、HIV、COVID-19 定量 準確度不完全依賴于擴增效率。...
數字PCR也叫Digital PCR(dPCR),是近幾年發展起來的一種核酸定量分析技術。相較于傳統熒光定量PCR來說,數字PCR對結果的判定不依賴于擴增曲線循環Ct值,不受擴增效率的影響,能夠直接讀出DNA的分子個數,能夠對起始樣本核酸分子***定量。 數字PCR基本原理是將一個樣本分成幾十到幾萬份,然后再將其分配到不同的反應單元中,使每個微滴單元包含一個或多個拷貝的核酸分子(即DNA模板),每個單元都會對目標分子進行擴增,然后再對每個單元進行熒光信號的統計并計算。相對而言,傳統PCR或qPCR反應都是發生于同一體系當中,這也是數字...
相對于二代測序、基因芯片和定量PCR而言,數字PCR具備以下優勢: ● 靈敏度可達到單個核酸分子:檢測限低至0.001%,主要系為數字PCR可以實現靶標DNA/RNA的生物濃縮; ● 無需標準曲線活參照基因進行對比來測定核算量,可對靶分子起始量進行***定量,直接獨處DNA分子的個數; ● 適合環境復雜樣品的檢測:終點PCR檢測,不依賴Ct值,不依賴擴增效率,能克服PCR***劑的影響,避免樣品間的交叉***問題,適合各類復雜環境中的樣本進行***定量,如動血樣、糞便、尿液、痰液、水樣、土壤、植物等; 永諾生物MicroDrop-100微滴式數字PCR儀超越行業的10萬個...
無創產前檢查 鐮狀細胞貧血(sickle cell anemia)是HBB基因突變引起的常染色體顯性遺傳病,有嚴重的危害,可以導致高達5%的胎兒死亡率及4.62%的孕婦死亡率。而精細有效的無創產前診斷是預防鐮狀細胞貧血患兒出生的有效方法。研究人員采用dPCR技術檢測孕婦胎兒游離DNA(cff-DNA)HBB基因突變。結果顯示,dPCR技術能夠確定87%的男性胎兒(n=45)和75%的女性胎兒(n=20)HBB基因的突變狀態。當cff-DNA濃度大于7%時,可以**的檢測出HBB基因突變[3],可以說是相當厲害了。 油包水乳化微滴技術,在微管道中利用氣壓驅動生成十...
MiniDrop數字PCR儀由Creator微滴生成儀、Detector微滴檢測儀、MD Microchip微流控芯片及MD Plotter數據分析軟件組成,該系統的**為微流控微滴生成技術,采用原創性的油液,在40um微管道中利用氣壓驅動在2分鐘內生成50萬微滴,單次運行生成400萬微滴,微滴體積達皮升級,檢測線性范圍達到5個數量級,各項指標均超越國內外的主流產品。 MiniDrop創新性采用高壓驅動的方法將樣本分割成50萬份,打破了國外廠商在微滴式數字PCR領域的壟斷。 ----- 無創產前篩查:低成本、快速。無錫永諾數字PCR哪家好 ...
MicroDrop-100數字PCR有什么優勢? 1.MicroDrop-100數字PCR所產生的微滴數是目前市面微滴式數字PCR里相對較高的產品,可將樣品分割為10萬份,更符合泊松分布數學模型,可以忽略更多的誤差因素;此外,高微滴數在多重數字PCR上的優勢也會更大。 2.數字PCR可選全中文界面,對國內用戶十分友好,可以說,拿到即可上手。 3.數字PCR是一個開放性的平臺,在試劑方面除了產品列表上的檢測試劑盒,還有通用的反應預混液,客戶自行設計引物探針即可進行新項目的檢測。此外,永諾非常歡迎進行定制、合作開發檢測試劑盒。 ...
MicroDrop-100微滴式數字PCR是具有國內自主知識產權的第三代JUE對定量PCR系統,整套系統由MicroDrop-100A微滴生成儀、 MicroDrop-100B微滴檢測儀以及結果數據分析設備等構成。系統通過自主設計的微流控芯片,利用油水相不兼容的原理,在2分鐘時間內將PCR體系分割成100,000油包水的體系,每個體系為**的PCR反應體系,體積約為0.2nL,單次實驗一次可生成8個樣本的油包水體系。由于油包水體系的分割效應,使得數字PCR受PCRYi制物的影響相對較小,有利于復雜環境樣本的實驗操作。區別于熒光定量PCR的過程性判讀方法,數字PCR結果判讀為終點法...
MicroDrop-100系統產品特點: 一、適應性廣,靈活性高 1、理論上可覆蓋qPCR(熒光定量PCR)的所有應用 2、樣本多樣性,樣本通量可達96個樣本,支持靈活設定 3、開放式平臺,支持用戶自行開發試劑、產品。 二、靈敏度高,準確性高 1、***定量——無需依賴標準曲線 2、采用微滴式技術高達100,000個的微滴 3、線性范圍達到6個數量級,靈敏度高達萬分之一 三、可分析復雜混合物 1、準確度不完全依賴于擴增效率 2、雙通道熒光檢測,支持EvaGreen染料及探針法 3、支持多重數字PCR ...
我國***擁有完全自主知識產權的微滴式數字PCR儀MiniDrop?研發成功并投入生產。這是國內***微滴式數字PCR檢測系統,能廣泛應用于醫療、農業、環境等領域,未來,采用外周血、唾液、尿液、腦脊液等樣本進行低成本、高靈敏、快速的無創檢測成為可能。 MiniDrop?數字PCR儀由Creator微滴生成儀、Detector微滴檢測儀、MD Microchip微流控芯片及MD Plotter數據分析軟件組成,該系統的**為微流控微滴生成技術,采用原創性的油液,在40um微管道中利用氣壓驅動在2分鐘內生成50萬微滴,單次運行生成400萬微滴,微滴體積達皮升級...
MicroDrop-100微滴式數字PCR是具有國內自主知識產權的第三代JUE對定量PCR系統,整套系統由MicroDrop-100A微滴生成儀、 MicroDrop-100B微滴檢測儀以及結果數據分析設備等構成。系統通過自主設計的微流控芯片,利用油水相不兼容的原理,在2分鐘時間內將PCR體系分割成100,000油包水的體系,每個體系為**的PCR反應體系,體積約為0.2nL,單次實驗一次可生成8個樣本的油包水體系。由于油包水體系的分割效應,使得數字PCR受PCRYi制物的影響相對較小,有利于復雜環境樣本的實驗操作。區別于熒光定量PCR的過程性判讀方法,數字PCR結果判讀為終點法...
與常規的PCR的方法相比,dPCR有很好的優勢。 ***定量 常規PCR和實時熒光PCR定量檢測都需要已知拷貝數的標準DNA制定標準曲線,由于樣品測定在各種條件上不會完全一致,會造成PCR擴增效率的差異,從而影響定量結果的準確性。而ddPCR不受標準曲線和擴增動力學影響,可以進行***定量。 樣品需求量低 在檢測珍貴樣品和樣品核酸存在降解時具有明顯的優勢。 高靈敏度 ddPCR本質上是將一個傳統的PCR反應分成了數萬個**的PCR反應,在這些反應中可以精確地檢測到很小的目的片段的差異、單拷貝甚至是低濃度混雜樣品,且能避免非同...
研究方向 病原微生物的檢測(***、細菌等) 疾病預防控制中心、出入境檢驗檢疫局系統的實驗室目前主要采用基于TaqMan探針法的定量PCR體系對病原微生物進行核酸水平的檢測,而這些目前正在使用著的檢測體系可以無縫地轉移到QX200上,從而滿足該類實驗室對于檢測結果的要求:靈敏度更高、重復性更好、無需依賴標準曲線的***定量結果,同時操作簡便。 對于其他類型的研究實驗室,也可以利用ddPCR靈敏度高的特點,對各種樣品中的病原微生物展開***的研究。如HIV抗逆轉錄***治療過程中***殘留量的監控;HBV耐藥突變...
MicroDrop-100數字PCR系統具有如下優點: 1、JUE對定量,結果判讀不需要依賴標準曲線; 2、突破局限,檢測靈敏度可低至萬分之一; 3、專利設計的具有高精度復雜三維微納防污染結構的微流控芯片,單張可同時處理1-8個樣本; 4、一鍵式自動操作,20uL PCR體系可生成100,000微滴,8個樣本單次微滴生成*需2分鐘; 5、FAM、HEX(VIC)雙熒光通道,半導體激光器做為激發光源相比LED光源,穩定性高,功率穩定不影響檢測靈敏度,單色性能優異降低對檢測特異性的影響,且方向性好; 6、檢測器為2個光電倍增管,靈敏度及增益優于MPCC或CC...
同時,從公式也可以看出,隨著反應陽性體系數(X)的增加,體系中目標分子的拷貝數相對于X會有較大的差距,隨著X的持續增加,數字PCR結果的不確定度也隨著提高,總體來說,數字PCR陽性體系的數量不得超過總體系數量的80%。另一個方面,N的增加會使整個數字PCR體系具有較大的線性范圍,并可以提高反應的靈敏度、穩定性以及可重復性。因此,目前dPCR都需要在成本可控的情況下,增加分配的腔室數和液滴數。 商業化dPCR平臺及其特點 發展到現在,市面上常見的dPCR主要有兩種:微滴式dPCR(droplet dPCR,ddPCR)和芯片式dPCR(chi...
dPCR的基本原理 目前dPCR主要有兩種形式,芯片式和液滴式,但基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或微滴中,每個反應器的核酸模板數少于或者等于1個。這樣經過PCR循環之后,有一個核酸分子模板的反應器就會給出熒光信號,沒有模板的反應器就沒有熒光信號。根據相對比例和反應器的體積,就可以推算出原始溶液的核酸濃度。可以使用幾種不同的方法來分配樣品,包括微孔板,毛細管,油乳劑和帶有核酸結合表面的小型化腔室陣列。樣品的分配使人們可以通過假設分子種群遵循泊松分布來估計不同分子的數量,根據泊松分布的原理,反應體系中目標分子的拷貝數可以通過公式A=-ln[(N-X)...
**個體化診療 通過檢測T790M位點突變情況,可以更好地評估一代TKI***的療效及耐藥情況并指導第三代TKI靶向藥Osimertinib的使用。然而,由于qPCR平臺ARMS檢測技術的靈敏度有限,沒有辦法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效準確的檢測到T790M突變。這個時候dPCR技術展現出了****的檢測精度,此外,dPCR***定量的優勢也能充分發揮出來了,可以監控突變含量變化,做到及早發現耐藥。 2.)基因表達分析 伊馬替尼(Imatinib)可以有效幫助很多慢性髓細胞白血病(CML)患者延長生存期,但是臨床上發現,伊馬替尼的療效與BCR-ABL1融合基因...
數字PCR也叫Digital PCR(dPCR),是近幾年發展起來的一種核酸定量分析技術。相較于傳統熒光定量PCR來說,數字PCR對結果的判定不依賴于擴增曲線循環Ct值,不受擴增效率的影響,能夠直接讀出DNA的分子個數,能夠對起始樣本核酸分子***定量。 數字PCR基本原理是將一個樣本分成幾十到幾萬份,然后再將其分配到不同的反應單元中,使每個微滴單元包含一個或多個拷貝的核酸分子(即DNA模板),每個單元都會對目標分子進行擴增,然后再對每個單元進行熒光信號的統計并計算。相對而言,傳統PCR或qPCR反應都是發生于同一體系當中,這也是數字...
數字PCR也叫Digital PCR(dPCR),是近幾年發展起來的一種核酸定量分析技術。相較于傳統熒光定量PCR來說,數字PCR對結果的判定不依賴于擴增曲線循環Ct值,不受擴增效率的影響,能夠直接讀出DNA的分子個數,能夠對起始樣本核酸分子***定量。 數字PCR基本原理是將一個樣本分成幾十到幾萬份,然后再將其分配到不同的反應單元中,使每個微滴單元包含一個或多個拷貝的核酸分子(即DNA模板),每個單元都會對目標分子進行擴增,然后再對每個單元進行熒光信號的統計并計算。相對而言,傳統PCR或qPCR反應都是發生于同一體系當中,這也是數字PCR與其比較大的區別...
研究方向 低豐度及稀有序列的精確定量 目前對于低豐度目標序列的檢測,定量PCR、雜交、毛細管測序及NGS等方法都因受到背景DNA的干擾,使得檢測靈敏度及精確性都達不到精細定量的要求(如定量PCR檢測中Ct值大于33的情況下,其重復性就不是很高), 而微滴式數字PCR系統通過**的微滴 化處理,使得稀有的核酸序列從大量的背景DNA中分離出來,從而提高了檢測的靈敏度及重復性。 此外,由于樣品微滴化處理的同時,也將樣品中可能存在的***劑進行了分裝,提高了數字PCR擴增對于***劑的耐受程度,因此可具體應用于很多臨床樣品(血液、尿液、...